Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Fosfo-Raf1-S621 para WB, ELISA - P04049

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de RAF1 (c-Raf)

• RAF1 (también conocida como c-Raf o Raf-1) es una serina/treonina proteína quinasa que actúa como un enlace regulador crítico entre las GTPasas Ras asociadas a membrana y la cascada MAPK/ERK, funcionando como un interruptor que controla las decisiones del destino celular, incluyendo la proliferación, diferenciación, apoptosis y supervivencia.
• La quinasa inicia una cascada de proteínas quinasa activadas por mitógenos (MAPK) fosforilando secuencialmente las quinasas MAPK de doble especificidad (MAP2K1/MEK1 y MAP2K2/MEK2) y las quinasas reguladas por señales extracelulares (MAPK3/ERK1 y MAPK1/ERK2).
• RAF1 fosforila diversos sustratos: BAD (en Ser-75, vía PAK1), adenil ciclasas (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inhibiendo la actividad de la fosfatasa) y TNNT2; también promueve la activación de NF-κB e inhibe las quinasas ROCK2, ASK1 y MST2.
• La proteína puede proteger a las células de la apoptosis translocándose a las mitocondrias, donde se une a BCL2 y desplaza a BAD; también restringe la activación de caspasas en respuesta a la estimulación de Fas, apoptosis de macrófagos mediada por patógenos y diferenciación eritroide.
• RAF1 contribuye a la transformación oncogénica mediante la represión de la proteína de unión estrecha ocludina (OCLN) al inducir la regulación por aumento del represor transcripcional SNAI2/SLUG.
• La localización subcelular incluye el citoplasma, la membrana celular, la mitocondria y el núcleo, reflejando sus múltiples roles reguladores.
• La proteína presenta un dominio de dedo de zinc, se une a ATP y está sujeta a fosforilación (p. ej., S621), metilación y splicing alternativo (el isoforma 1 es más abundante en el músculo esquelético).
• Las palabras clave asociadas con RAF1 incluyen cardiomiopatía, sordera, variante de enfermedad, protooncogén y serina/treonina proteína quinasa, lo que indica su participación tanto en la fisiología normal como en la enfermedad.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosforilado sintético; asegúrese de procesar las muestras con inhibidores de fosfatasas para preservar el estado de fosforilación durante la lisis y la preparación.
• Para la transferencia Western (Western blotting), espere una banda a aproximadamente 73 kDa; incluya controles apropiados como lisados tratados con fosfatasa o células estimuladas frente a no estimuladas para confirmar la especificidad fosforo.
• Dado que la fosforilación de RAF1 es dinámica, considere usar un anticuerpo total de RAF1 en paralelo para normalizar las señales e interpretar con precisión los cambios de activación.
• En ELISA, optimice la concentración del antígeno de recubrimiento y la dilución del anticuerpo; una curva estándar con un péptido fosfo conocido puede ayudar en la cuantificación.
• Se informa reactividad cruzada con tejido de rata; valide el rendimiento del anticuerpo en su sistema específico de modelo de rata, ya que la intensidad de la señal puede variar entre las muestras.

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