Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-Raf1 (Ser621) - P04049

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de RAF1

• RAF1, también conocido como c-Raf o Raf-1, es una serina/treonina proteína quinasa codificada por el gen RAF1. Funciona como un enlace regulatorio crítico entre las GTPasas Ras asociadas a membrana y la cascada de señalización MAPK/ERK, controlando procesos celulares clave como la proliferación, diferenciación, apoptosis y transformación oncogénica.
• RAF1 activada fosforila y activa las quinasas de doble especificidad MAP2K1/MEK1 y MAP2K2/MEK2, que a su vez fosforilan las quinasas reguladas por señales extracelulares MAPK3/ERK1 y MAPK1/ERK2, propagando señales aguas abajo.
• Más allá de la vía canónica MAPK, RAF1 fosforila múltiples otros sustratos, incluyendo BAD (en Ser-75), adenil ciclasas (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A y TNNT2, vinculándola a diversas funciones celulares como la regulación de la apoptosis y la señalización del cAMP.
• RAF1 se localiza en el citoplasma, membrana celular, mitocondria y núcleo. Su translocación a la mitocondria permite la unión a BCL2 y el desplazamiento de BAD, proporcionando un mecanismo antiapoptótico adicional.
• En el músculo esquelético, la isoforma 1 de RAF1 es más abundante que la isoforma 2, lo que sugiere roles regulatorios específicos del tejido.
• RAF1 es un protooncogén implicado en varios cánceres; su actividad desregulada promueve la transformación oncogénica, en parte mediante la represión de proteínas de unión estrecha como la ocludina a través de la regulación positiva de SNAI2/SLUG.
• La proteína contiene un dominio dedo de zinc y está sujeta a múltiples modificaciones postraduccionales, incluyendo fosforilación, que regulan estrictamente su actividad quinasa y distribución subcelular.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético fosforilado correspondiente a Ser621 de RAF1 humano. Se espera que reconozca específicamente RAF1 fosforilado en este residuo. Para la detección de RAF1 total, puede ser necesario un anticuerpo pan como control.
• Para Western blot, utilice protocolos estándar pero asegúrese de incluir inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis e incubación para preservar la fosforilación. Se anticipa la detección de una banda cerca de 73 kDa en muestras humanas apropiadas.
• Para inmunoprecipitación, optimice la concentración de anticuerpo y el tiempo de incubación para su sistema experimental. Se recomienda la preclarificación y los controles de isotipo apropiados.
• Para ELISA, este anticuerpo puede usarse para captura o detección; valide la afinidad de unión y especificidad con controles de péptidos fosforilados y no fosforilados.
• Siempre valide el anticuerpo en su matriz de muestra específica y condiciones experimentales; el rendimiento puede variar con el tipo de célula y el estado de estimulación.

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