Anticuerpo monoclonal de conejo Anti-Fosfo-RB1 (S780) para WB y ELISA - P06400

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de RB1

• La proteína asociada al retinoblastoma (RB1) es un supresor tumoral clave y regulador del ciclo celular, que controla la transición G1/S y la progresión G0-G1. Su actividad se rige por el estado de fosforilación.
  Referencias relacionadas: PMID:10499802 PMID:15084261
• La RB1 hipofosforilada se une e inhibe los factores de transcripción E2F, bloqueando la transcripción de los genes necesarios para la entrada a la fase S. Tanto enmascara físicamente el dominio de transactivación de E2F como recluta represores modificadores de cromatina.
  Referencias relacionadas: PMID:10499802
• RB1 contribuye directamente a la formación y mantenimiento de la heterocromatina al estabilizar la metilación de histonas, destacando su capacidad para reclutar SUV39H1 y KMT5B/C para metilar H4K20 y reforzar la heterocromatina constitutiva.
• La proteína también media la represión transcripcional a través de SMARCA4/BRG1 al anclar complejos de histona desacetilasa (HDAC) a promotores como c-FOS. En las neuronas, esta represión se alivia por la desfosforilación de RB1 dependiente de calcio.
• Oncoproteínas virales (antígeno T grande de SV40, E7 del VPH, E1A del adenovirus) se dirigen a RB1, disociando el complejo RB1-E2F para impulsar la entrada de la célula huésped a la fase S.
• Subcelularmente, RB1 se encuentra principalmente en el núcleo, donde ejerce sus funciones regulatorias de la transcripción, pero también puede localizarse en el citoplasma.
• Se expresa en la retina y queratinocitos del prepucio, con expresión adicional en muchos tipos de tejidos.
  Referencias relacionadas: PMID:20940255
• Las modificaciones postraduccionales incluyen una extensa fosforilación (por ejemplo, en S780 por quinasas dependientes de ciclina), acetilación y metilación, que modulan en conjunto su actividad, interacciones proteicas y estabilidad. Las palabras clave incluyen regulador de cromatina, supresor tumoral e interacción huésped-virus.

Guía experimental y consejos técnicos

• Este anticuerpo monoclonal de conejo fosfoespecífico se dirige al sitio de fosforilación S780 de RB1; asegure el estado de fosforilación de la muestra tratando las células con los estímulos adecuados (por ejemplo, estimulación con suero, inhibidores de CDK4/6) e incluya siempre inhibidores de fosfatasa durante la lisis para preservar el epítopo.
• Para Western blot, la banda esperada es de ~106 kDa. Valide la especificidad utilizando un control de bloqueo con péptido no fosforilado y compare las señales en lisados tratados con fosfatasa frente a lisados sin tratar.
• En ELISA, considere utilizar péptidos sintéticos fosforilados y no fosforilados como antígenos de recubrimiento para confirmar la selectividad por el estado de fosforilación.
• Se informa de reactividad cruzada para humano y rata; si utiliza muestras de ratón, verifique la homología de secuencia alrededor de S780 y realice un experimento piloto.
• Optimice la dilución del anticuerpo de forma empírica, ya que no se proporciona una concentración de trabajo validada, e incluya siempre controles positivos (por ejemplo, líneas celulares cancerosas proliferativas) y negativos (por ejemplo, nulas para RB1 o privadas de suero).

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