Anticuerpo Policlonal Anti-Fosfo-Smad5 (S463/S465) para WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de Smad5

• SMAD5 es un miembro de la familia SMAD de transductores de señales intracelulares y moduladores transcripcionales, también conocido como JV5-1, Mothers against decapentaplegic homolog 5, o MADH5.
• Tras la unión del ligando BMP, SMAD5 es fosforilado en serinas conservadas del extremo C-terminal (incluidas S463 y S465) por los receptores de BMP tipo I activados, luego se asocia con SMAD4 para formar un complejo heteromérico que se transloca al núcleo para regular la expresión de genes diana. Referencias relacionadas: PMID:9442019, PMID:33510867
• Como factor de transcripción, SMAD5 fosforilado reconoce Elementos de Unión a Smad (SBEs) en los promotores de genes para modular diversos procesos celulares como el desarrollo embrionario, la diferenciación celular, la angiogénesis y la homeostasis tisular. Referencias relacionadas: PMID:12064918, PMID:16516194
• En su estado no fosforilado, SMAD5 opera en el citoplasma para influir en el metabolismo energético interactuando con la hexoquinasa 1 (HK1) para acelerar la glucólisis y promoviendo la respiración mitocondrial en respuesta a cambios en el pH citoplasmático. Referencias relacionadas: PMID:28675158
• SMAD5 se localiza predominantemente en el citoplasma y el núcleo, pero también en la mitocondria, lo que refleja sus roles multifuncionales.
• La proteína se expresa de manera ubicua en todos los tejidos y está sujeta a modificaciones postraduccionales que incluyen fosforilación y acetilación; se une al ADN y a iones de zinc.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido fosforilado sintético alrededor de S463 y S465, lo que sugiere que el anticuerpo reconoce específicamente a Smad5 fosforilado en estos sitios diana del receptor BMP. Considere usar inhibidores de fosfatasas durante la preparación de la muestra para preservar la fosforilación.
• Para Western blot (WB), el peso molecular predicho es de 52 kDa; valide la detección en lisados celulares relevantes estimulados con BMP (por ejemplo, muestras de humano, ratón, rata).
• Para inmunohistoquímica (IHC-P), optimice la recuperación del antígeno y valide en secciones de tejido donde la señalización BMP esté activa; considere usar controles de isotipo para confirmar la especificidad.
• Este anticuerpo puede reaccionar de forma cruzada con Smad5 no fosforilado u otros miembros de la familia Smad; verifique la especificidad comparando las señales en muestras estimuladas frente a no estimuladas o usando inhibidores específicos.
• En ELISA, utilice competición con péptido fosfo para confirmar la especificidad fosfo, y calibre usando estándares conocidos.

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