Anticuerpo policlonal de conejo Anti-Fosfo-SMO (S611/S615) para WB, ELISA - Q99835

Especificaciones y parámetros principales del producto

Información biológica: Función y localización de SMO

• SMO (smoothened) es un receptor acoplado a proteínas G y un transductor fundamental de la vía de señalización Hedgehog, esencial para el desarrollo embrionario y la homeostasis de los tejidos adultos.
• En ausencia de ligandos de Hedgehog, SMO es inhibido por el receptor patched (PTCH1/PTCH2), que restringe el acceso del colesterol a SMO; la unión de Hedgehog a patched alivia esta inhibición, permitiendo la translocación de SMO al cilio primario y su activación por el colesterol. Referencias relacionadas: PMID:27437577 PMID:28344083 PMID:32929279
• Tras la activación, SMO se acopla a la proteína G G(i), inhibiendo la adenilato ciclasa y reduciendo los niveles de AMPc; esto desreprime a la proteína quinasa A (PKA), lo que conduce a la estabilización y activación de los factores de transcripción GLI. Referencias relacionadas: PMID:28344083 PMID:31168089
• SMO activo también puede inhibir directamente a PKA al secuestrar su subunidad catalítica PRKACA en la membrana celular, evitando la fosforilación y procesamiento de los factores de transcripción GLI. Referencias relacionadas: PMID:36202993 PMID:39138140
• SMO se localiza principalmente en la membrana celular y en la membrana del cilio primario, un compartimento clave para la señalización de Hedgehog.
• El anticuerpo reconoce específicamente la fosforilación en los residuos de serina 611 y 615, modificaciones postraduccionales que probablemente influyen en la conformación, actividad o tráfico de SMO.
• Las mutaciones en SMO están implicadas en diversos trastornos del desarrollo y cánceres, lo que pone de relieve su papel regulador crítico.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado alrededor de Ser611/Ser615 de SMO humano; para Western blot, se espera una banda cerca de 86 kDa. Para confirmar la especificidad por fosforilación, considere tratar las muestras con lambda fosfatasa o utilizar un competidor de péptido no fosforilado.
• Debido a que los estados de fosforilación de SMO pueden ser dinámicos, es recomendable el uso de cócteles de inhibidores de fosfatasas durante la lisis; incluya también controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, células estimuladas con Hedgehog frente a células no estimuladas).
• La detección por Western blot puede requerir la optimización del bloqueo y la dilución del anticuerpo; pruebe un rango de concentraciones y valídelo en líneas celulares o tejidos humanos con señalización Hedgehog activa (por ejemplo, fibroblastos tratados con SHH).
• Para ELISA, el anticuerpo puede ser adecuado para detectar péptidos de SMO fosforilados o lisados celulares; confirme la unión con un péptido específico para fosforilación y un control no fosforilado para evaluar la especificidad.

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