Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-SQSTM1/p62-S349 para WB, ELISA - Q13501

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de SQSTM1/p62

• SQSTM1, también conocido como p62, funciona como un adaptador molecular para la macroautofagia selectiva (agrefagia), conectando agregados de proteínas poliubiquitinadas y autofagosomas a través de sus dominios UBA y LIR. Referencias relacionadas: PMID:15340068 PMID:15953362 PMID:16286508
• Tras unirse a proteínas ubiquitinadas a través del dominio UBA, SQSTM1 sufre separación de fases líquido-líquido para formar cuerpos p62, que luego son destinados a degradación autofágica. Referencias relacionadas: PMID:15911346 PMID:20168092 PMID:22017874
• SQSTM1 también sirve como un centro de señalización, activando la respuesta antioxidante NFE2L2/NRF2 al secuestrar KEAP1 en cuerpos de inclusión, promoviendo así la acumulación nuclear de NRF2 y la expresión de genes citoprotectores. Referencias relacionadas: PMID:20452972 PMID:28380357 PMID:33393215
• Subcelularmente, SQSTM1 se localiza en múltiples compartimentos, incluyendo autofagosomas, vesículas citoplasmáticas, cuerpos PML en el núcleo, endosomas tardíos, lisosomas y el sarcómero en células musculares.
• La proteína es una fosfoproteína conocida, y la fosforilación en varios residuos (incluyendo Ser349) afecta su oligomerización, reconocimiento de carga y regulación de la autofagia.
• Ampliamente expresado en tejidos, SQSTM1 está implicado en enfermedades neurodegenerativas, cáncer y señalización inmune.
• Contiene varios dominios funcionales: PB1 (polimerización), dedo de zinc tipo ZZ, TB (de unión a TRAF6), LIR (región de interacción con LC3) y UBA (asociado a ubiquitina), lo que permite diversas interacciones proteína-proteína.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético fosforilado que rodea a Ser349, lo que sugiere que el anticuerpo reconoce específicamente a SQSTM1 fosforilado en este sitio. Confirme la especificidad mediante tratamiento con fosfatasa o comparando señales en células estimuladas vs. no estimuladas cuando sea apropiado.
• Para el análisis de Western blot, utilice un gel de SDS-PAGE reductor e incluya inhibidores de fosfatasas frescos en el tampón de lisis para preservar la fosforilación. Se puede observar una banda alrededor de 48–62 kDa dependiendo de la muestra; SQSTM1 a menudo migra más alto debido a modificaciones postraduccionales.
• Para aplicaciones de ELISA, los ensayos de ELISA suelen requerir optimización del pH de recubrimiento y de las diluciones del anticuerpo. Valide el rango lineal del anticuerpo con péptidos competidores fosforilados y no fosforilados conocidos.
• Se reporta reactividad cruzada con ratón y rata, lo que lo hace adecuado para estudios en modelos de roedores; siempre verifique en su sistema experimental específico.

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