Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Fosfo-Src-Y529 para WB y ELISA - P12931

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de Src

• Src es un protooncogén que codifica una tirosina quinasa no receptora activada por diversos receptores, controlando la transcripción génica, la respuesta inmune, la adhesión celular, el ciclo celular, la apoptosis y la migración (PubMed:34234773). Referencias relacionadas: PMID:34234773

• En las adhesiones focales, Src fosforila PTK2/FAK1 y paxilina tras la unión de integrinas, regulando la adhesión y migración celular (PubMed:21411625). Referencias relacionadas: PMID:21411625

• Src contribuye a la remodelación del citoesqueleto de actina mediante la fosforilación de AFAP1 y cortactina (CTTN).

• SRC media la internalización del EGFR a través de la fosforilación de la cadena pesada de clatrina (CLTC) en la Tir-1477 (PubMed:18586953). Referencias relacionadas: PMID:18586953

• En los osteoclastos, Src es esencial para la resorción ósea al formar un complejo con PTK2B/PYK2 y fosforilar CBL para activar la señalización de PI3K (PubMed:14585963, PubMed:8755529). Referencias relacionadas: PMID:14585963 PMID:8755529

• Src se localiza en la membrana celular, adhesiones focales, citoplasma, citoesqueleto, núcleo, membrana mitocondrial interna y región perinuclear.

• Se expresa de forma ubicua con los niveles más altos en plaquetas, neuronas y osteoclastos; también se detecta en la piel (PubMed:22294297). Referencias relacionadas: PMID:22294297

• La actividad quinasa de Src está estrictamente controlada por fosforilación, siendo la autofosforilación en la Tir-419 del bucle de activación la que promueve la actividad (Por similitud).

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blot, utilice condiciones desnaturalizantes y reductoras; el peso molecular esperado es de aproximadamente 60 kDa. Incluya inhibidores de fosfatasas durante la preparación de la muestra para preservar la fosforilación en Y529.
• En ELISA, el péptido inmunógeno fosforilado puede emplearse como antígeno de recubrimiento, y la especificidad debe confirmarse mediante pruebas paralelas con un péptido control no fosforilado.
• Valide la reactividad en líneas celulares humanas conocidas por expresar Src (por ejemplo, HeLa o A549) bajo condiciones que estimulen la fosforilación de Y529, como la privación de suero seguida de tratamiento con pervanadato.
• Optimice las diluciones del anticuerpo empíricamente para cada aplicación; comúnmente, las diluciones iniciales para WB oscilan entre 1:500 y 1:2000, pero las concentraciones de trabajo finales deben ser determinadas por los usuarios finales.

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