Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-Ubiquitina-Ser65 para WB, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Ubiquitina

• La ubiquitina es una proteína altamente conservada de 76 aminoácidos expresada a partir de cuatro genes (RPS27A, UBA52, UBB, UBC), que produce proteínas de fusión (por ejemplo, ubiquitina-proteína ribosomal eS31 y eL40) y precursores de poliubiquitina.
• Actúa como un modificador postraduccional mediante la conjugación covalente a residuos de lisina de proteínas diana, formando cadenas de ubiquitina monoméricas o poliubiquitina. Los diferentes tipos de enlace (Lys-6, -11, -29, -33, -48, -63 y lineales) dictan diversos resultados celulares, incluida la degradación por el proteasoma (Lys-48), la reparación del ADN (Lys-6/63), la endocitosis y la señalización de NF-κB (Lys-63).
• Como fusión con la proteína ribosomal eS31, la ubiquitina es parte integral de la subunidad ribosomal 40S y es esencial para el ensamblaje del procesoma de la subunidad pequeña y la biogénesis de ribosomas. Referencias relacionadas: PMID:23636399 PMID:9582194 PMID:34516797
• La ubiquitina se localiza predominantemente en el citoplasma y el núcleo, incluido el nucléolo, en consonancia con sus funciones en la degradación de proteínas, la señalización y la biogénesis de ribosomas.
• Las modificaciones postraduccionales, incluida la fosforilación en Ser65, la acetilación y la ADP-ribosilación, regulan la estructura y función de la ubiquitina. La fosforilación en Ser65 modula específicamente el ensamblaje de cadenas de ubiquitina y está implicada en la mitofagia y la señalización inmunitaria innata.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Para Western blot, considere usar inhibidores de fosfatasas en los tampones de lisis para preservar la fosforilación en Ser65.
• Valide la fosfo-especificidad tratando las muestras con fosfatasa lambda; la señal debería desaparecer tras la desfosforilación.
• Incluya controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, células estimuladas vs. no estimuladas) para confirmar la especificidad del anticuerpo.
• Para ELISA, optimice la concentración del antígeno de recubrimiento y la dilución del anticuerpo para lograr una relación señal/ruido óptima.
• Tenga en cuenta que el anticuerpo puede reconocer la ubiquitina de los cuatro genes debido a la secuencia conservada alrededor de Ser65; considere usar silenciamientos génicos específicos si es necesario.

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