Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-Fosfo-Zap70-Y319+Syk-Y352 para WB, IF/ICC, ELISA - P43403/P43405

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de ZAP70

• ZAP70 (proteína asociada a la cadena zeta de 70 kDa) es una tirosina quinasa citoplasmática perteneciente a la familia Syk, también conocida como tirosina quinasa relacionada con Syk (SRK).
• Esencial para la señalización del receptor de células T (TCR): tras la activación del TCR, ZAP70 es reclutado hacia motivos ITAM fosforilados en las cadenas CD3, donde es fosforilado y activado por LCK, iniciando cascadas de señalización descendentes. Referencias relacionadas: PMID:7509083
• La ZAP70 activada fosforila las proteínas adaptadoras LAT y LCP2, desencadenando una red de señalización que regula la activación, proliferación, producción de citoquinas y diferenciación de las células T.
• Además de la señalización del TCR, ZAP70 controla la adhesión, motilidad y reorganización del citoesqueleto de las células T; también media la internalización y degradación del TCR mediante la interacción con CBL, SLA y SLA2, modulando así los niveles de TCR en la superficie.
• ZAP70 también contribuye al desarrollo y activación de las células B a través de la señalización del receptor de células B (BCR).
• Durante el desarrollo de los timocitos, ZAP70 promueve la supervivencia y la progresión del ciclo celular de los timocitos doble negativos CD4/CD8 antes de la selección positiva.
• Localización subcelular: predominantemente citoplasmática, pero se transloca a la membrana plasmática tras la estimulación del TCR.
• Expresión tisular: principalmente en células T y células asesinas naturales (NK), con niveles más bajos en timocitos tempranos y células B pro/pre.
• Las características clave incluyen dominios SH2 en tándem en el extremo N-terminal que se unen a ITAM fosforilados, un dominio quinasa con un sitio de unión a ATP y múltiples sitios de fosforilación (p. ej., Y319) que regulan la actividad; anotado con palabras clave como fosfoproteína, splicing alternativo y variante de enfermedad.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un fosfopéptido sintético alrededor de Y319 de ZAP70 humano; el anticuerpo también reconoce el fosfo-Y352 correspondiente de Syk debido a la similitud de secuencia alrededor del sitio de fosforilación.
• Para la transferencia Western (Western blotting), considere el uso de lisados de líneas celulares T estimuladas con anti-CD3 o pervanadato para inducir una fosforilación robusta; incluya un control de desfosforilación (p. ej., tratamiento con λ-fosfatasa) para confirmar la especificidad fosforo.
• En inmunofluorescencia/ICC, optimice las condiciones de fijación y permeabilización para preservar tanto el epítopofo como la arquitectura celular; realice una tinción de contraste con un anticuerpo total de ZAP70 para evaluar el estado de activación.
• Para ELISA, se puede emplear un antígeno de recubrimiento de fosfopéptido; asegúrese de que los pasos de bloqueo minimicen la unión inespecífica.
• La reactividad cruzada con ratón permite la detección en modelos de células T murinas; sin embargo, valide la reactividad en el sistema experimental específico.
• El peso molecular predicho de ZAP70 es de ~70 kDa; para Syk, detecte la isoforma de ~72 kDa. En WB, esto puede aparecer como bandas muy próximas o una sola banda dependiendo de la resolución.

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