Anticuerpo monoclonal anti-PKA C-alfa (PRKACA) validado por KD para WB, IF/ICC, ELISA - P17612

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de PKA C-alfa (PRKACA)

• PRKACA codifica la subunidad catalítica alfa de la proteína quinasa dependiente de cAMP (PKA), una quinasa de serina/treonina que fosforila numerosos sustratos citoplasmáticos y nucleares, desempeñando un papel central en las cascadas de señalización de cAMP (PubMed:15642694, PubMed:15905176, PubMed:16387847). Referencias relacionadas: PMID:15642694 PMID:15905176 PMID:16387847

• La enzima modula la estructura de la cromatina y la transcripción al fosforilar la histona H1.4 y la subunidad p50 de NF-kappa-B (NFKB1), influyendo en la expresión génica y la actividad de unión al ADN (PubMed:15178447, PubMed:15642694, PubMed:15905176). Referencias relacionadas: PMID:15178447 PMID:15642694 PMID:15905176

• En las plaquetas, PRKACA fosforila VASP para mantener las plaquetas circulantes en un estado de reposo; tras la interrupción por trombina o colágeno, la PRKACA libre y activa promueve la agregación plaquetaria (PubMed:15642694, PubMed:20356841). Referencias relacionadas: PMID:15642694 PMID:20356841

• PRKACA actúa como un inhibidor clave de la vía de señalización de smoothened al fosforilar los factores de transcripción GLI (GLI1, GLI2, GLI3), promoviendo su procesamiento y evitando la activación de genes diana en ausencia de ligandos hedgehog (PubMed:16705181, PubMed:36202993, PubMed:39138140). Referencias relacionadas: PMID:16705181 PMID:36202993 PMID:39138140

• Subcelularmente, PRKACA se localiza en el citoplasma, núcleo, membrana celular, mitocondrias y proyecciones específicas como cilios y flagelos, lo que refleja sus diversas funciones reguladoras. La expresión tisular es isoforma-específica: la isoforma 1 es ubicua, mientras que la isoforma 2 es específica de espermatozoides y está enriquecida en espermatocitos en paquiteno.

• Modificaciones postraduccionales, incluida la miristoilación del extremo N-terminal y la fosforilación, regulan su actividad catalítica, su direccionamiento subcelular y su estabilidad. El empalme alternativo da lugar a las distintas isoformas.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Este anticuerpo se generó utilizando proteína recombinante humana de PRKACA; presenta reactividad cruzada con humano, ratón y rata, lo que lo hace adecuado para estudios en estas especies. Valide los niveles de expresión endógena en su sistema modelo antes de realizar análisis cuantitativos.
• Para WB, el peso molecular esperado es aproximadamente 41 kDa; incluya controles positivos y negativos apropiados (por ejemplo, lisados sobreexpresando PRKACA y tratados con siRNA) para confirmar la especificidad de la banda.
• Para IF/ICC, considere protocolos de fijación/permeabilización que preserven la antigenicidad; espere patrones de tinción citoplasmática y nuclear consistentes con la localización reportada.
• Para ELISA, titule el anticuerpo para obtener una relación señal/ruido óptima y combínelo con un anticuerpo secundario adecuado; valide el rendimiento utilizando proteína recombinante o lisados celulares.
• El estado "validado por KD" indica que la especificidad del anticuerpo se ha confirmado mediante enfoques de silenciamiento mediados por siRNA o shRNA; considere incluir controles de silenciamiento en sus ensayos para verificar aún más la dependencia de la señal con respecto a la expresión del objetivo.

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