Anticuerpo Monoclonal Anti-PKM2 para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P14618

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de PKM2

• PKM2 cataliza el paso final limitante de la velocidad de la glucólisis transfiriendo un grupo fosforilo desde fosfoenolpiruvato (PEP) a ADP, generando ATP. La actividad de la enzima está regulada por un equilibrio dinámico entre un tetrámero muy activo y un dímero casi inactivo, determinando el destino de los carbonos de la glucosa hacia la producción de energía o la biosíntesis. Referencias relacionadas: PMID:15996096 PMID:1854723 PMID:20847263
• El gen PKM genera dos isoformas principales mediante splicing alternativo: la isoforma M1 adulta (PKM1) y la isoforma M2 embrionaria (PKM2). PKM2 posee baja actividad intrínseca de piruvato quinasa y requiere activación alostérica por D-fructosa 1,6-bisfosfato (FBP), mientras que PKM1 es constitutivamente activa. Referencias relacionadas: PMID:18337823 PMID:20847263
• Además de su rol metabólico citoplasmático, PKM2 funciona como una proteína quinasa nuclear. Ante estímulos como la activación del receptor EGF, PKM2 se transloca al núcleo y fosforila objetivos incluyendo STAT3 en Tyr-705 y la histona H3 en Thr-11, promoviendo la transcripción de genes involucrados en la proliferación celular, angiogénesis (p. ej., VEGFA) y tumorigénesis. Referencias relacionadas: PMID:18191611 PMID:21620138 PMID:22056988 PMID:22306293 PMID:22901803 PMID:24120661 PMID:33314660 PMID:26787900 PMID:17308100
• PKM2 se expresa predominantemente en células altamente proliferativas, incluyendo células madre embrionarias, células de carcinoma embrionario y células cancerosas, lo que lo convierte en un biomarcador tumoral bien establecido. La isoforma adulta PKM1 se expresa en tejidos adultos normales y generalmente está ausente en tumores. Referencias relacionadas: PMID:18337823
• PKM2 se localiza tanto en el citoplasma como en el núcleo. Su translocación nuclear es inducida por varias vías de señalización y es crítica para sus funciones oncoogénicas no metabólicas.
• Las modificaciones post-traduccionales como acetilación, fosforilación, hidroxilación y metilación regulan estrictamente la actividad metabólica de PKM2, la estabilidad de la proteína y la importación nuclear, vinculando el estado metabólico celular con las redes de señalización.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético que abarca los aminoácidos 380–480 del PKM2 humano (NP_002645.3), el cual se encuentra dentro de la región única C-terminal que distingue a PKM2 de la isoforma M1. Este diseño sugiere una alta especificidad para PKM2 sobre PKM1.
• Para Western blot, el peso molecular predicho de PKM2 es de aproximadamente 58 kDa. Valide el rendimiento del anticuerpo usando controles positivos apropiados (p. ej., líneas celulares de cáncer humano) y considere optimizar la dilución del anticuerpo primario y los tiempos de exposición.
• En inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), pruebe diferentes protocolos de fijación y permeabilización para preservar la localización de PKM2, ya que puede ser tanto citoplasmática como nuclear.
• Para inmunoprecipitación (IP), use condiciones de lisis nativas para mantener los complejos proteicos y confirme la eficiencia de captura del objetivo.
• Al realizar ELISA, establezca curvas estándar con proteína PKM2 recombinante y valide la sensibilidad y especificidad en la matriz de muestra relevante.
• Se indica reactividad cruzada con PKM2 de ratón y rata; verifique el reconocimiento del objetivo en su sistema experimental específico usando controles específicos de la especie.

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