Anticuerpo monoclonal de conejo anti-PLOD2/LH2 para WB, ELISA - O00469

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de PLOD2/LH2

• PLOD2 codifica la prolilcolágeno-lisina,2-oxoglutarato 5-dioxigenasa 2 (lisil hidroxilasa 2, LH2), miembro de la familia de las lisil hidroxilasas que modifica los residuos de lisina del colágeno.
• LH2 cataliza la hidroxilación de los residuos de lisina en las secuencias -Xaa-Lys-Gly- del colágeno, formando hidroxilisina; estas hidroxilisas sirven como sitios de unión para carbohidratos y son esenciales para la estabilidad de los enlaces cruzados intermoleculares del colágeno.
• La enzima se localiza en la membrana del retículo endoplásmico rugoso y en el citoplasma, donde tiene lugar la modificación cotraduccional del colágeno.
• La expresión tisular es más elevada en el páncreas y el músculo; las isoformas 1 y 2 se expresan ampliamente, mientras que la isoforma 2 se detecta específicamente en la piel, los pulmones, la duramadre y la aorta.
• Múltiples variantes de transcritos codifican diferentes isoformas; las modificaciones postraduccionales incluyen glucosilación, fosforilación y unión a hierro/metales, y el ascorbato (vitamina C) es necesario como cofactor.
• PLOD2 está asociado con variantes patológicas relacionadas con la osteogénesis imperfecta, y la proteína sirve como componente del proteoma de referencia en la identificación proteómica.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es una proteína de fusión recombinante que abarca los aminoácidos 260–380 de PLOD2/LH2 humana (NP_000926.2); confirme que la región epitópica esté presente en la isoforma y la especie objetivo.
• Para el western blot (WB), se recomienda utilizar un tampón de carga reductor y un gel de SDS-PAGE al 6–8% para resolver la proteína de aproximadamente 85 kDa; considere optimizar la concentración del anticuerpo entre 0,1 y 1 μg/mL.
• En aplicaciones de ELISA, pueden utilizarse formatos indirectos o de captura; valide la idoneidad del par de anticuerpos para ensayos tipo sándwich si desarrolla pruebas cuantitativas.
• Se ha informado reactividad cruzada con muestras humanas y de rata; la reactividad frente a otras especies debe verificarse mediante la alineación de secuencias de la región inmunógena.
• Realice controles adecuados, incluidas líneas celulares productoras de colágeno (p. ej., fibroblastos y osteoblastos) y controles negativos (p. ej., lisados con PLOD2 silenciado o eliminado).

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