Anti-POLR2A (extremo N-terminal) mAb de conejo para WB, IP, ChIP, ELISA - P24928

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de POLR2A

• POLR2A codifica la subunidad catalítica más grande de la ARN polimerasa II (Pol II), que sintetiza precursores de ARNm y muchos ARN no codificantes funcionales utilizando nucleósidos trifosfatos como sustratos. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• Durante la iniciación de la transcripción, la Pol II se recluta a los promotores del ADN, y POLR2A forma el centro activo junto con POLR2B, aportando un motivo DxDGD coordinador de Mg²⁺ esencial para la adición de nucleótidos. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112

• El dominio C-terminal (CTD) único está formado por 52 repeticiones de heptapéptidos y actúa como plataforma para el ensamblaje de factores que regulan la iniciación, elongación y terminación de la transcripción, así como el procesamiento cotranscripcional. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092

• POLR2A presenta actividad intrínseca de exonucleasa de corrección de errores 3'→5', que permite la eliminación de nucleótidos mal incorporados mediante retroceso y escisión del enlace fosfodiester. Referencias relacionadas: PMID:8381534

• La fosforilación del CTD en la Ser-5 media la salida del promotor, mientras que la fosforilación en la Ser-2 es necesaria para la liberación de la pausa durante la elongación; la metilación y acetilación de las lisinas del CTD ajustan finamente los niveles de expresión génica. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092

• Más allá de la transcripción dependiente de ADN, POLR2A puede funcionar como ARN polimerasa dependiente de ARN, extendiendo ARN no codificantes y replicando el genoma del virus de la hepatitis delta durante la infección. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596

• La proteína se localiza en el núcleo, el citoplasma y los cromosomas, lo que refleja sus roles dinámicos en la transcripción y el procesamiento del ARN.

• El empalme alternativo genera múltiples isoformas, y las variantes asociadas a enfermedades en POLR2A se han relacionado con trastornos del neurodesarrollo (por ejemplo, NEDHIB).

Guía experimental y consejos técnicos

• El blanco del inmunógeno (aa 550-650) se encuentra dentro de la región N-terminal y está conservado entre humano, ratón y rata, lo que sustenta la reactividad cruzada observada; se recomienda realizar una alineación de secuencias para otras especies.
• Para Western blot, se espera una banda cerca de 217 kDa; utilice un gel de SDS-PAGE de bajo porcentaje (por ejemplo, 6%) y optimice las condiciones de transferencia para proteínas de alto peso molecular.
• En inmunoprecipitación de cromatina (ChIP), valide la especificidad del anticuerpo con loci genómicos positivos y negativos, y optimice los protocolos de reticulación y fragmentación debido al gran tamaño del complejo de Pol II.
• Para inmunoprecipitación (IP), condiciones de lisis suaves y la inclusión de tratamiento con nucleasa pueden mejorar la solubilidad de la POLR2A unida a cromatina.
• El anticuerpo también es adecuado para ELISA; considere emparejarlo con un anticuerpo de captura para la detección basada en sándwich de complejos nativos de Pol II.

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