Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-POLR2A para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P24928

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de POLR2A

• POLR2A codifica la subunidad más grande (RPB1) de la ARN polimerasa II dirigida por ADN, la enzima responsable de sintetizar precursores de ARNm y muchos ARN no codificantes en células eucariotas.
• RPB1 forma el núcleo catalítico de la Pol II junto con la segunda subunidad más grande, RPB2. Contiene un motivo DxDGD conservado que coordina un ion Mg²⁺ esencial para la adición de nucleótidos durante la polimerización del ARN. Referencias relacionadas: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• La enzima cicla a través de la iniciación, elongación y terminación de la transcripción. Durante la iniciación, la Pol II se recluta en promotores que contienen elementos como la caja TATA o islas CpG. Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• RPB1 posee un dominio C-terminal único (CTD) compuesto por 52 repeticiones heptapéptidas. El CTD experimenta una fosforilación dinámica (especialmente en Ser-2 y Ser-5) para coordinar las etapas de transcripción y reclutar factores de procesamiento. Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• Además de su actividad de ARN polimerasa dependiente de ADN, POLR2A puede actuar como una ARN polimerasa dependiente de ARN, extendiendo ARN no codificantes y mediando la replicación del virus de la hepatitis delta.
• La proteína se localiza predominantemente en el núcleo, pero también se encuentra en el citoplasma y asociada con los cromosomas durante la mitosis.
• Las mutaciones en POLR2A se asocian con trastornos del neurodesarrollo, incluida la discapacidad intelectual (NEDHIB), lo que destaca su papel esencial en la expresión génica.
• El empalme alternativo y las modificaciones postraduccionales (acetilación, metilación, ubiquitinación, fosforilación) diversifican aún más la función y regulación de POLR2A.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a la región N-terminal (aa 1-260) de POLR2A humana, que se encuentra fuera del CTD repetitivo. Este diseño puede conferir especificidad por el núcleo de RPB1 sobre el CTD altamente homólogo que se encuentra en algunas otras proteínas.
• Se ha demostrado que el anticuerpo funciona en WB, IF/ICC, IP y ELISA. Al realizar WB, tenga en cuenta el peso molecular predicho de ~217 kDa; considere el uso de un gel SDS-PAGE de bajo porcentaje y una optimización exhaustiva de la transferencia para una proteína tan grande.
• Se informa reactividad cruzada con ratón y rata, lo que sugiere que el epítopo se conserva en estas especies. Valide en su sistema modelo específico para confirmarlo.
• Para IF/ICC, se espera una tinción nuclear y perinuclear basada en la localización de POLR2A; sin embargo, el fondo puede variar dependiendo de las condiciones de fijación y permeabilización.
• En experimentos de IP, asegúrese de que el tampón de lisis sea compatible con la extracción de proteínas nucleares para solubilizar eficazmente los complejos de Pol II.

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