Anticuerpo policlonal de conejo anti-Proteinasa K - P06873

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de la Proteinasa K

• La Proteinasa K es una serina proteasa de amplio espectro aislada originalmente del hongo Parengyodontium album (anteriormente Tritirachium album), codificada por el gen PROK.
• Pertenece a la familia de las serina proteasas similares a la subtilisina y se caracteriza por la tríada catalítica clásica (Asp-His-Ser), responsable de la hidrólisis de los enlaces peptídicos.
• La enzima escinde preferentemente los enlaces peptídicos adyacentes a residuos de aminoácidos aromáticos e hidrofóbicos, lo que permite una degradación eficaz de la queratina y otras proteínas recalcitrantes.
• La Proteinasa K se sintetiza como una preproproteína con un péptido señal y un propéptido, que se eliminan proteolíticamente para generar la enzima madura activa de aproximadamente 28,9 kDa (forma madura), con un peso molecular de la preproteína completa de alrededor de 40,3 kDa.
• Su estabilidad y actividad aumentan mediante la unión al calcio, que la protege frente a la autólisis y la desnaturalización térmica; dos enlaces disulfuro estabilizan aún más la estructura terciaria.
• Se han determinado estructuras tridimensionales (por ejemplo, entradas del PDB), que revelan un plegamiento típico de la subtilisina con una hendidura profunda de unión al sustrato.
• Debido a su sólida actividad proteolítica de amplio espectro, la Proteinasa K se emplea ampliamente en biología molecular para eliminar proteínas durante la purificación de ácidos nucleicos y en diversas aplicaciones industriales.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es una proteína recombinante de Proteinasa K, que puede presentar epítopos tanto nativos como desnaturalizados; tenga esto en cuenta al elegir entre condiciones nativas y desnaturalizantes para su ensayo.
• Para WB, asegúrese de preparar adecuadamente las muestras, incluidos los tampones de lisis y los inhibidores de proteasas apropiados, para evitar la degradación de la diana. Utilice un anticuerpo secundario anti-conejo adecuado y optimice el bloqueo para reducir el fondo.
• Para ELISA, valide el ensayo con controles positivos y negativos conocidos; la reactividad del anticuerpo con el antígeno nativo puede diferir de la observada con el antígeno recubierto, por lo que deben considerarse estrategias de inmovilización del antígeno.

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