Anticuerpo policlonal de conejo anti-RAG1 para WB, ELISA - P15918

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: función y localización de RAG1

• RAG1 (proteína 1 activadora de la recombinación, también conocida como RAG-1 y RNF74) es el componente catalítico del complejo RAG, esencial para la recombinación V(D)J que ensambla diversos genes de inmunoglobulinas y receptores de células T en los linfocitos en desarrollo.
• Se une directamente a las secuencias señal de recombinación conservadas (RSS) y cataliza roturas de doble cadena específicas del sitio mediante un mecanismo de dos pasos: primero realiza un corte aguas arriba del heptámero, seguido de la formación de una horquilla mediante transesterificación, lo que genera extremos señal romos y extremos codificantes en forma de horquilla. RAG2 es necesaria para todas las actividades catalíticas.
• Además de su actividad endonucleasa, RAG1 funciona como una ligasa E3 de ubiquitina-proteína que monoubiquitina la histona H3 en sitios desconocidos, una modificación necesaria para la etapa de unión de la recombinación V(D)J. Asimismo, la trimetilación de H3 en Lys-4 (H3K4me3) estimula ambas etapas de escisión.
• RAG1 se localiza en el núcleo, donde interactúa con la cromatina para mediar los eventos de recombinación.
• Su expresión está restringida a las células linfoides en maduración, en consonancia con su función en el desarrollo de los linfocitos.
• RAG1 también participa en la exclusión alélica de las células pre-B al inducir el reposicionamiento dependiente de ATM de un alelo de inmunoglobulina hacia la heterocromatina pericentromérica, evitando la recombinación del segundo alelo y garantizando la clonalidad.
• La proteína experimenta corte y empalme alternativo, y su naturaleza multifuncional se refleja en términos clave como unión al ADN, endonucleasa, hidrolasa, unión a metales (dedo de zinc), transferasa, conjugación de UBL y variantes patológicas asociadas con la inmunodeficiencia combinada grave (SCID).

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca la región N-terminal (aminoácidos 1-270) de RAG1 humano, que incluye el dominio de unión al ADN. Esta región puede detectar múltiples isoformas derivadas del corte y empalme alternativo.
• Para el inmunoblotting, el peso molecular previsto es de aproximadamente 119 kDa. Se recomienda considerar el uso de un gel de SDS-PAGE al 6-8 % y tiempos de transferencia prolongados para proteínas de alto peso molecular.
• Los protocolos de ELISA pueden utilizar proteína RAG1 recombinante o recubrimiento con péptidos; valide las condiciones del ensayo en su matriz de muestra para garantizar la especificidad.
• Se espera reactividad cruzada con ratón; valide el rendimiento en tejidos linfoides o líneas celulares de ratón si se utiliza en estos sistemas.
• Los extractos proteicos de líneas celulares linfoides humanas o de ratón (por ejemplo, Jurkat, Raji, EL4) probablemente sean controles positivos adecuados; las líneas celulares no linfoides pueden servir como controles negativos.

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