Anticuerpo Policlonal Anti-RB para WB, IF/ICC, ELISA - P06400

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de RB

• RB (proteína asociada al retinoblastoma) es un supresor tumoral y regulador clave de la transición del ciclo celular G1/S. La forma hipofosforilada se une a factores de transcripción E2F, reprimiendo la transcripción de genes necesarios para la entrada en fase S. La fosforilación dependiente de ciclina/CDK libera a los E2F, desencadenando la progresión del ciclo celular (PubMed:10499802). RB también promueve la transición G0-G1 mediante la fosforilación por CDK3/ciclina-C (PubMed:15084261).

  Referencias relacionadas: PMID:10499802 PMID:15084261

• Participa directamente en la formación de heterocromatina al estabilizar la metilación de histonas y reclutar las metiltransferasas de histonas SUV39H1, KMT5B y KMT5C. Controla la trimetilación de la lisina-20 de la histona H4, lo que conduce a una represión transcripcional epigenética.

• Media la represión transcripcional por SMARCA4/BRG1 mediante el reclutamiento de un complejo de histona desacetilasa (HDAC) al promotor de c-FOS. En neuronas en reposo, un complejo represor fosfo-RB1-HDAC1 inhibe la transcripción de c-FOS; la entrada de calcio desfosforila RB1 a través de la calcineurina, liberando la represión.

• La localización subcelular incluye el núcleo y el citoplasma.

• Se expresa en la retina y los queratinocitos del prepucio (a nivel de proteína) (PubMed:20940255).

  Referencias relacionadas: PMID:20940255

• Sujeto a modificaciones postraduccionales clave: acetilación, metilación y una fosforilación extensa que regulan su actividad e interacciones.

• Durante la infección viral, el antígeno T grande de SV40, la proteína E7 de VPH o la proteína E1A de adenovirus se unen a RB1, interrumpiendo el complejo RB1-E2F1 y aboliendo su función de supresor tumoral.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a la región C-terminal (aa 701-928), que está bien conservada y es probable que genere reactividad contra la RB de longitud completa (~106 kDa).
• Para Western blot, utilice un escalador de proteínas de rango medio para resolver claramente la banda de 106 kDa. Se recomiendan extractos nucleares para la detección óptima de RB endógeno. Valide el anticuerpo en líneas celulares humanas relevantes (p. ej., aquellas con estado de RB conocido) y considere un control de péptido de bloqueo si se observa ruido de fondo.
• En IF/ICC, optimice las condiciones de fijación y permeabilización; la fijación con metanol puede preservar mejor los epítopos nucleares de RB. Para ELISA, el inmunógeno recombinante puede servir como control positivo.
• Como anticuerpo policlonal producido en conejo, la consistencia entre lotes puede variar. Incluya los controles apropiados y valide cada nuevo lote.

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