Anticuerpo monoclonal de conejo anti-REST/NRSF para WB, IP, ELISA - Q13127

Especificaciones y parámetros principales del producto

Contexto biológico: función y localización de REST/NRSF

• REST/NRSF es un represor transcripcional con dedos de zinc que se une al elemento silenciador restrictivo de las neuronas (NRSE) y silencia la expresión de genes neuronales en células no neuronales. Referencias relacionadas: PMID:11741002 PMID:11779185 PMID:12399542
• Recluta los correpresores SIN3A y RCOR1, que a su vez reclutan histona desacetilasas, y también media la represión a través del complejo BHC mediante la desacetilación y desmetilación de histonas, lo que conduce a la compactación de la cromatina. Referencias relacionadas: PMID:10449787 PMID:10734093
• REST también puede reprimir la transcripción mediante el reclutamiento de CDYL y de la histona metiltransferasa EHMT2, un proceso potencialmente importante para la supresión de la transformación celular. Referencias relacionadas: PMID:19061646
• En las células madre neurales, REST mantiene la represión de los genes neuronales, preservando la quiescencia y evitando la diferenciación prematura. Referencias relacionadas: PMID:21258371
• En condiciones hipóxicas, REST actúa como un represor clave al unirse directamente a los sitios NRSE en los promotores de los genes diana; también media la resistencia al estrés en el cerebro envejecido y contribuye a la muerte neuronal inducida por isquemia, en parte mediante la represión de miR-132. Referencias relacionadas: PMID:27531581 PMID:24670762
• El corte y empalme alternativo produce isoformas, incluida una isoforma corta que puede formar heterodímeros con REST de longitud completa e inhibir su actividad represora; el corte y empalme dependiente de SRRM4 genera una isoforma de REST esencial para la audición. Referencias relacionadas: PMID:11741002 PMID:11779185
• REST es predominantemente nuclear, pero también puede detectarse en el citoplasma; es una fosfoproteína, está sujeta a ubiquitinación y contiene múltiples dominios de dedos de zinc.
• Se expresa ubicuamente, con niveles más altos en los tejidos linfoides; en el cerebro, REST se expresa en poblaciones neuronales específicas y su disminución nuclear está relacionada con la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson y la demencia con cuerpos de Lewy, donde puede acumularse en los cuerpos de Lewy. Referencias relacionadas: PMID:8568247 PMID:24670762 PMID:30684677 PMID:26053433

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético de los aminoácidos 100–200 de REST/NRSF humano; esta región puede estar presente en múltiples isoformas. Considere realizar una alineación de secuencias para evaluar el posible reconocimiento de isoformas.
• Para la transferencia Western (WB), se espera una banda de aproximadamente 122 kDa, en consonancia con el peso molecular previsto. Las modificaciones postraduccionales (por ejemplo, fosforilación y ubiquitinación) pueden causar ligeros cambios en la migración o bandas adicionales.
• REST es una proteína nuclear; los protocolos eficaces de extracción nuclear o los lisados de células completas que incluyan fracciones nucleares pueden mejorar su detección en WB e IP.
• Para la inmunoprecipitación (IP), el formato monoclonal de conejo suele ofrecer una alta especificidad y un bajo nivel de fondo; incluya un control de isotipo adecuado.
• En ELISA, utilice un ensayo de bloqueo con péptido para verificar la unión específica; el péptido inmunógeno puede utilizarse como control positivo.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con REST de ratón y rata; valide las condiciones del ensayo en la especie prevista, ya que la conservación del epítopo puede influir en el rendimiento.

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