Anticuerpo monoclonal de conejo anti-RhoGAP (p190-B) para WB, IP, ELISA - Q13017

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de RhoGAP

• La proteína 5 activadora de GTPasas Rho (ARHGAP5, también conocida como p190-B o RhoGAP5) es un miembro de la familia RhoGAP que funciona como proteína activadora de GTPasas (GAP) para las pequeñas GTPasas de la familia Rho, potenciando su actividad intrínseca de hidrólisis de GTP para finalizar la señalización (PubMed:8537347). Referencias relacionadas: PMID:8537347
• La proteína experimenta un corte y empalme alternativo, generando múltiples isoformas que pueden presentar una expresión específica de tejido y diversidad funcional.
• ARHGAP5 se localiza principalmente en el citoplasma y puede asociarse con la membrana celular, en consonancia con su función en la regulación de las GTPasas Rho en sitios de señalización próximos a la membrana.
• La proteína es una fosfoproteína y su actividad puede estar modulada por la fosforilación de tirosinas, vinculándola con las vías de señalización de factores de crecimiento e integrinas.
• Se detecta específicamente a nivel proteico en fibroblastos cutáneos, lo que sugiere una función en la biología de los fibroblastos y posiblemente en la cicatrización de heridas o la remodelación del tejido conectivo.
• Palabras clave de UniProt: estructura 3D, corte y empalme alternativo, membrana celular, citoplasma, activación de GTPasas, membrana, nitración, fosfoproteína, identificación proteómica, proteoma de referencia, repetición. Estas destacan sus características estructurales y reguladoras.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 1150–1300 de RhoGAP humano (Q13017), una región que puede estar bien conservada entre especies (presenta reactividad cruzada con ratón y rata). Valide la especificidad en la especie correspondiente mediante alineamiento de secuencias o un análisis inicial por Western blot.
• Para Western blot, el peso molecular previsto es de aproximadamente 172 kDa. Utilice porcentajes de gel adecuados (por ejemplo, SDS-PAGE al 6–8 %) y controles de carga. Confirme la especificidad de la banda utilizando lisados de control positivo (por ejemplo, lisados de fibroblastos cutáneos, según los datos de expresión tisular).
• En los experimentos de inmunoprecipitación (IP), optimice la concentración del anticuerpo mediante titulación e incluya controles IgG adecuados. Considere reticular el anticuerpo a las perlas para reducir la interferencia de las cadenas pesadas en la detección posterior por WB.
• Para ELISA, combínelo con un anticuerpo de detección compatible o utilícelo como anticuerpo de captura según el formato del ensayo. Valide con proteína RhoGAP recombinante o lisados celulares que expresen la diana.
• Dado que el anticuerpo es monoclonal (de conejo), se espera un rendimiento uniforme entre lotes. No obstante, vuelva a validarlo con cada lote nuevo en su aplicación y sistema de muestras específicos.

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