Anticuerpo monoclonal de conejo anti-RNF8 para WB, IHC-P, ELISA - O76064

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de RNF8

• La E3 ubiquitina-proteína ligasa RNF8 (proteína con dedo RING 8) es un mediador clave de la respuesta al daño del ADN, reclutada a las roturas de doble cadena por MDC1 fosforilado por ATM, donde cataliza la ubiquitinación ligada a 'Lys-63' de las histonas H2A y H2AX, facilitando el ensamblaje de proteínas de reparación del ADN como BRCA1 y TP53BP1 en focos inducidos por radiación ionizante.
  Referencias relacionadas: PMID:18001824, PMID:18006705
• RNF8 promueve el reclutamiento del complejo de anemia de Fanconi y factores como FAAP20 a los enlaces cruzados entre cadenas de ADN mediante la mediación de la ubiquitinación de H2A/H2AX, y también coordina el silenciamiento transcripcional dependiente de ATM cerca de las DSB para evitar colisiones entre transcripción y reparación.
• A través de distintas interacciones con enzimas E2, RNF8 puede formar cadenas de poliubiquitina ligadas a 'Lys-48' (por ejemplo, con UBE2L6), lo que conduce a la degradación proteasomal de sustratos como CHEK2, JMJD2A/KDM4A y KU80/XRCC5, modulando así la elección de la vía de reparación y la accesibilidad de la cromatina.
  Referencias relacionadas: PMID:11322894, PMID:14981089, PMID:17724460
• Contribuye a la descondensación de la cromatina de orden superior e indirectamente activa la quinasa ATM al promover la ubiquitinación de la histona H2B que desencadena la acetilación de H4K16.
• RNF8 es esencial para la espermatogénesis, impulsando el reemplazo de histonas durante la maduración de los espermatozoides, y participa en la recombinación de cambio de clase en el sistema inmunológico a través de su papel en la reparación de DSB.
  Referencias relacionadas: PMID:22865450
• La proteína se localiza predominantemente en el núcleo, con presencia adicional en el citoplasma, el cuerpo medio y en los telómeros, lo que es consistente con sus roles multifacéticos en la progresión del ciclo celular y la estabilidad del genoma.
• La expresión tisular es ubicua, con los niveles más altos en cerebro, timo e hígado durante el desarrollo fetal, y en cerebro y testículos en adultos, lo que subraya su amplia importancia en la reparación del ADN y la regulación de la cromatina.
• La proteína RNF8 contiene un dominio de dedo RING y se clasifica como una fosfoproteína, con un peso molecular de ~55.5 kDa (UniProt: 55518 Da). Las palabras clave también destacan sus implicaciones en las interacciones huésped-virus, la unión a metales (zinc) y la conjugación de ubiquitina.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos N-terminales 1–260 de RNF8 humano; por lo tanto, el anticuerpo puede reconocer epítopos dentro de la región N-terminal, incluido el dominio FHA, que está involucrado en interacciones dependientes de fosforilación.
• Para Western blot, se espera que RNF8 migre a un peso molecular aparente de ~56 kDa en lisados celulares de humano, ratón y rata; utilice controles positivos y negativos adecuados para confirmar la especificidad.
• Para IHC-P, considere optimizar la recuperación de antígeno (por ejemplo, tampón de citrato, pH 6.0) y validar en tejidos con expresión conocida de RNF8, como testículos o cerebro.
• Para ELISA, los usuarios finales deben determinar las concentraciones de recubrimiento óptimas y las condiciones de detección utilizando el antígeno recombinante o los tipos de muestra relevantes.
• Se ha reportado reactividad cruzada con RNF8 de ratón y rata; verifique el rendimiento en los sistemas modelo relevantes antes del uso rutinario.

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