Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Rpb1 CTD para WB, IF/ICC, IHC-P, ChIP, ELISA - P24928

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de Rpb1 CTD

• POLR2A codifica Rpb1, la subunidad catalítica más grande de la ARN polimerasa II dirigida por ADN (Pol II), responsable de sintetizar precursores de ARNm y ARN no codificantes. La enzima utiliza el ADN como molde y ribonucleósidos trifosfatos para polimerizar el ARN, avanzando a través de las etapas de iniciación, elongación y terminación. (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474, PubMed:8381534, PubMed:9852112) Referencias relacionadas: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:28108474, PMID:8381534, PMID:9852112
• El CTD de Rpb1, que contiene 52 repeticiones en tándem de heptapéptidos, actúa como andamio para los reguladores de la transcripción. La fosforilación en Ser5 (Ser5P) facilita la liberación del promotor, mientras que la fosforilación en Ser2 (Ser2P) es necesaria para la liberación de la pausa y la elongación. Además, la acetilación de lisinas en el CTD regula la inducción de genes de respuesta temprana, y la metilación/dimetilación generalmente reprime la expresión de genes diana. (PubMed:24207025, PubMed:26124092) Referencias relacionadas: PMID:24207025, PMID:26124092
• Rpb1 posee una actividad exonucleasa 3'→5' que prueba la lectura del ARN naciente, permitiendo el retroceso y la escisión de nucleótidos mal incorporados. (PubMed:8381534) Referencias relacionadas: PMID:8381534
• Más allá de su rol dependiente de ADN, Rpb1 exhibe actividad de ARN polimerasa dependiente de ARN, extendiendo ARN no codificantes utilizando un molde interno, y puede replicar el genoma del virus de la hepatitis delta cuando se asocia con el antígeno delta pequeño viral.
• Rpb1 se localiza principalmente en el núcleo, donde ocurre la transcripción, pero también se ha detectado en el citoplasma y en los cromosomas, lo cual es consistente con sus roles en la transcripción y potenciales funciones extranucleares.
• Las modificaciones postraduccionales en Rpb1 incluyen fosforilación, acetilación, metilación, ubiquitinación y sumoilación, regulando dinámicamente su actividad e interacciones.
• El empalme alternativo de POLR2A da lugar a múltiples isoformas, aunque las diferencias funcionales aún deben dilucidarse completamente.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 1611-1710 dentro del CTD, lo que sugiere que el anticuerpo detecta el Rpb1 total o un epítopo específico del CTD; verifique la reactividad dependiente de fosforilación utilizando muestras tratadas con fosfatasa.
• Para la transferencia Western (Western blotting), se predice que la proteína Rpb1 de longitud completa está en ~217 kDa; bandas adicionales (p. ej., ~64 kDa) pueden representar isoformas o productos de degradación; valide con los controles apropiados.
• Este anticuerpo se ha aplicado en ensayos ChIP; optimice las condiciones de entrecruzamiento y fragmentación de cromatina para sus loci diana específicos.
• Para inmunofluorescencia, espere una tinción nuclear; realice una tinción simultánea con un marcador citoplasmático para confirmar la localización.

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