Anticuerpo policlonal de conejo anti-Rubicon para WB, ELISA - Q92622

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de Rubicon

• Rubicon (proteína que contiene un dominio Run, un dominio de interacción con Beclin-1 y un dominio rico en cisteína), también conocida como Baron, está codificada por el gen RUBCN (KIAA0226). El corte y empalme alternativo produce múltiples isoformas.
• Rubicon funciona como un inhibidor central de la autofagia y del transporte endosomal: suprime la actividad de PIK3C3, altera la función del complejo PI3KC3-C2, bloquea la maduración de los autofagosomas y evita la activación de Rab7 dependiente de UVRAG en los endosomas. Referencias relacionadas: PMID:20974968 PMID:21062745
• En los macrófagos activados, Rubicon promueve las respuestas antibacterianas al estabilizar el complejo de oxidasa NADPH CYBA:CYBB, mejorar la producción de ROS dependiente de TLR2 y potenciar la eliminación fagocítica. Referencias relacionadas: PMID:22423966
• Tras una infección fúngica o viral, Rubicon regula negativamente la producción de citocinas proinflamatorias al unirse a CARD9 y secuestrarla de los complejos de señalización. Referencias relacionadas: PMID:22423967
• A nivel subcelular, Rubicon se localiza en endosomas tardíos, lisosomas y endosomas tempranos, en consonancia con sus funciones en el transporte endocítico y la regulación de los autofagosomas.
• La proteína contiene sitios de fosforilación y está sujeta a modificaciones postraduccionales; está implicada en las vías de neurodegeneración y ha sido identificada en estudios proteómicos.
• Peso molecular previsto de 108,6 kDa; experimentalmente migra aproximadamente a 109 kDa en SDS-PAGE.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde al dominio N-terminal (aminoácidos 1-200), por lo que puede detectar todas las isoformas conocidas. Verifique la especificidad en lisados celulares y tisulares pertinentes.
• Para Western blot, considere utilizar SDS-PAGE reductora y una membrana de nitrocelulosa; la banda esperada es de aproximadamente 109 kDa.
• Las concentraciones de trabajo óptimas deben determinarse experimentalmente; las diluciones iniciales habituales para anticuerpos policlonales en WB oscilan entre 1:500 y 1:2000.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con Rubicon de ratón y rata, por lo que es adecuado para estudios comparativos en modelos de roedores.
• Para ELISA, considere utilizar el inmunógeno recombinante como control positivo y ajustar la titulación del anticuerpo en consecuencia.
• Valide el anticuerpo en su sistema experimental específico utilizando controles positivos y negativos (por ejemplo, lisados con silenciamiento o eliminación de RUBCN).

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