Anticuerpo monoclonal de conejo anti-RXRα para WB, IP, IF/ICC, ChIP, ChIP-seq, ELISA - P19793

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de RXRα

• RXRα (receptor de ácido retinoico RXR-alfa) es un receptor nuclear codificado por el gen RXRA, también designado NR2B1. Pertenece a la superfamilia de receptores nucleares y funciona como un factor de transcripción dependiente de ligando que se une al ácido 9-cis retinoico con alta afinidad. PubMed:1310260 Referencias relacionadas: PMID:1310260

• En el núcleo, RXRα forma heterodímeros con los receptores de ácido retinoico (RARs) y se une a elementos de respuesta al ácido retinoico (RAREs) compuestos por sitios 5'-AGGTCA-3' en tándem (DR1-DR5). En ausencia de ligando, los heterodímeros RXR-RAR reclutan complejos correpresores que promueven la desacetilación de histonas y la condensación de la cromatina, reprimiendo la transcripción. La unión del ligando desencadena la disociación del correpresor y el reclutamiento de coactivadores, lo que lleva a la activación transcripcional. PubMed:10195690, PubMed:11162439, PubMed:11915042, PubMed:20215566, PubMed:37478846, PubMed:9267036 Referencias relacionadas: PMID:10195690 PMID:11162439 PMID:11915042 PMID:20215566 PMID:37478846 PMID:9267036

• RXRα sirve como un socio heterodimérico común para numerosos otros receptores nucleares, incluido PPARα. El heterodímero RXRA/PPARA es esencial para la actividad transcripcional de PPARα en genes de oxidación de ácidos grasos como ACOX1 y genes del sistema del citocromo P450. PubMed:10195690, PubMed:11915042, PubMed:28167758 Referencias relacionadas: PMID:10195690 PMID:11915042 PMID:28167758

• La localización subcelular incluye el núcleo, donde ejerce funciones reguladoras transcripcionales, así como el citoplasma y las mitocondrias. Su traslado puede facilitar la importación nuclear de socios de heterodimerización como VDR y NR4A1. PubMed:12145331, PubMed:15509776 Referencias relacionadas: PMID:12145331 PMID:15509776

• RXRα sufre múltiples modificaciones postraduccionales, incluida acetilación, fosforilación y ubiquitinación (formación de enlaces isopeptídicos). Estas modificaciones regulan su estabilidad, afinidad de unión al ADN y actividad transcripcional. Palabras clave: Acetilación, Fosfoproteína, Conjugación Ubl, Enlace isopeptídico.

• Además de la regulación metabólica, RXRα juega un papel en la inmunidad innata al regular negativamente genes antivirales como IFN tipo I, atenuando así las respuestas inmunitarias durante la infección viral. También promueve la fagocitosis de restos de mielina y la remielinización en macrófagos. PubMed:25417649, PubMed:26463675 Referencias relacionadas: PMID:25417649 PMID:26463675

• La expresión tisular es amplia: altamente expresado en hígado, riñón y cerebro; también detectado en fibroblastos pulmonares y monocitos. Su papel en la senescencia celular está vinculado a la represión de ITPR2 y la regulación de la señalización del calcio. PubMed:30216632, PubMed:26463675, PubMed:14702039, PubMed:2159111, PubMed:24275569 Referencias relacionadas: PMID:30216632 PMID:26463675 PMID:14702039 PMID:2159111 PMID:24275569

• El heterodímero RXRα/RARB puede actuar como represor o activador transcripcional dependiendo del contexto del elemento de ADN RARE, destacando su versátil papel en la regulación génica. PubMed:29021580 Referencias relacionadas: PMID:29021580

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a la región N-terminal (aa 1-100) de RXRα humano, un dominio involucrado en la transactivación dependiente de ligando y posiblemente en interacciones con correguladores. Esta estrategia de diseño puede conferir alta especificidad y afinidad tanto para las formas no modificadas como para las modificadas postraduccionalmente del receptor.

• El anticuerpo está validado para Western blotting (WB) para detectar una banda a 51 kDa. Dada la expresión ubicua de RXRα en hígado, riñón y cerebro, estos tejidos sirven como controles positivos adecuados. Para inmunoprecipitación (IP), considere usar extractos nucleares de células cultivadas o muestras de tejido.

• En inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y ChIP-seq, RXRα es reclutado a RAREs en todo el genoma. Un locus de control positivo bien caracterizado es el gen del receptor beta de ácido retinoico (RARB), que contiene un RARE DR5 canónico. Para obtener mejores resultados, trate las células con ácido 9-cis retinoico o ácido retinoico todo-trans antes del entrecruzamiento.

• Para inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC), el anticuerpo se puede usar para monitorear la translocación nuclear de RXRα tras la estimulación con ligando. La tinción conjunta con un marcador nuclear o marcadores de orgánulos (por ejemplo, colorante mitocondrial) puede proporcionar un contexto de localización adicional.

• Al realizar ELISA tipo sándwich, emparejar este anticuerpo monoclonal con un anticuerpo de detección policlonal dirigido a un epítopo distinto puede mejorar la sensibilidad. Valide el ensayo utilizando estándares de proteína RXRα recombinante y verifique la reactividad cruzada con otras isoformas de RXR (RXRβ, RXRγ) según sea necesario.

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