Anticuerpo policlonal de conejo anti-S100A8 para WB, IHC-P, ELISA - P27005

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de S100A8

• S100A8 es una pequeña proteína de unión a calcio y zinc (10295 Da) que pertenece a la familia S100, también conocida como calgranulina-A, MRP-8, p8 y CP-10.
• Desempeña un papel destacado en la regulación de procesos inflamatorios y respuestas inmunitarias innatas, principalmente mediante la inducción de la quimiotaxis y adhesión de neutrófilos.
• Intracelularmente, como parte del complejo S100A8/A9 (calprotectina), facilita el tráfico de ácido araquidónico en los leucocitos, modula la reorganización del citoesqueleto dependiente de tubulina durante la migración de fagocitos y activa la NADPH-oxidasa promoviendo el ensamblaje del complejo enzimático y transfiriendo ácido araquidónico al complejo.
• Extracelularmente, S100A8 actúa como una alarmina o molécula DAMP, uniéndose a receptores de reconocimiento de patrones como TLR4 y AGER, lo que desencadena la señalización de MAP quinasa y NF-κB para amplificar las cascadas proinflamatorias; también posee actividad antimicrobiana directa mediante la quelación de Zn²⁺.
• La proteína puede inducir la muerte celular a través de la autofagia y la apoptosis mediante la interacción entre mitocondrias y lisosomas que involucra ROS y BNIP3, y regula la supervivencia de los neutrófilos a través de las vías MEK-ERK mediadas por ITGAM/ITGB y TLR4.
• Según las palabras clave de UniProt y los datos funcionales, S100A8 está involucrado en eventos de S-nitrosilación como parte del complejo transnitrosilasa iNOS-S100A8/A9, contribuyendo a la modificación sitio-selectiva de proteínas diana.
• Subcelularmente, S100A8 se encuentra en el citoplasma, asociado al citoesqueleto, en la membrana celular y también se secreta al espacio extracelular.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado fue una proteína recombinante que cubre los aminoácidos 1-89 de S100A8 de ratón (NP_038678.1). Dado que esta secuencia corresponde a casi la totalidad de la proteína (peso molecular previsto ~10 kDa), el anticuerpo debería reconocer la forma nativa. Para Western blot, se espera una banda de alrededor de 10–12 kDa; la reducción y desnaturalización pueden ayudar a exponer completamente el epítopo.
• Como anticuerpo policlonal, puede presentar ligeras variaciones entre lotes; considere validar el rendimiento con un control positivo conocido, como lisado de médula ósea o bazo de ratón, o células estimuladas para expresar S100A8 (por ejemplo, macrófagos tratados con LPS).
• Para inmunohistoquímica (IHC-P), se deben optimizar las condiciones de recuperación de antígeno (por ejemplo, recuperación de epítopos inducida por calor con tampón citrato pH 6.0) y puede ser necesaria la inactivación de la peroxidasa endógena. Verifique la reactividad cruzada con tejidos de rata según lo indicado.
• En aplicaciones de ELISA, recubra con S100A8 recombinante o utilice un formato tipo sándwich con un par de anticuerpos compatible; confirme la especificidad con controles negativos relevantes.

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