Anticuerpo monoclonal Anti-SARS-CoV-2 3CLpro para WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la glucoproteína Spike

• La glucoproteína de espiga (S) es una proteína de fusión de clase I trimérica que media la entrada viral al unirse al receptor del huésped enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) (PubMed:32142651, PubMed:32155444, PubMed:33607086). Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Tras la unión al receptor, la proteína S sufre escisión proteolítica en el sitio S2' por proteasas del huésped como TMPRSS2 o catepsina L, desencadenando cambios conformacionales irreversibles que impulsan la fusión de membranas (PubMed:32142651, PubMed:32703818, PubMed:34159616, PubMed:34561887). Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• La proteína de espiga también es capaz de utilizar receptores alternativos para la entrada, incluidos la neuropilina-1 (NRP1) y la neuropilina-2 (NRP2), lo que puede contribuir a la infección de las células epiteliales olfativas con baja expresión de ACE2 (PubMed:33082294, PubMed:33082293). Referencias relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293
• Además, el receptor de asialoglicoproteína 1 (ASGR1) puede servir como un receptor alternativo de manera independiente a ACE2 (PubMed:34837059). Referencias relacionadas: PMID:34837059
• La proteína S se localiza en la membrana del virión y también se encuentra en el compartimiento intermedio entre el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi (ERGIC) del huésped y en la membrana celular del huésped durante la infección.
• Contiene dos regiones de repetición de heptadas (HR1 y HR2) que forman una estructura de haz de seis hélices crítica para la fusión de membranas, y la proteína está fuertemente glicosilada con múltiples enlaces disulfuro y sitios de palmitoilación.
• La proteína de espiga también actúa como un superantígeno e inhibe las respuestas inmunitarias innatas del huésped, incluido el antagonismo de la tetherina, contribuyendo a la evasión inmunitaria.

Orientación experimental y consejos técnicos

• Para Western blot (WB), se puede observar una banda a ~34 kDa (monómero 3CLpro); considere el uso de inhibidores de proteasas durante la preparación de la muestra para evitar la degradación de la proteasa viral.
• En inmunofluorescencia (IF/ICC), asegure una fijación y permeabilización adecuadas para la detección de 3CLpro citoplasmático en células infectadas por SARS-CoV-2; valide en líneas celulares de control positivo apropiadas.
• Las aplicaciones de ELISA pueden requerir la titulación del anticuerpo y el antígeno recombinante 3CLpro; considere un formato de ELISA sándwich para alta sensibilidad.
• Debido a la conservación de la secuencia, no se puede excluir la reactividad cruzada con 3CLpro de otros coronavirus; verifique la especificidad en el sistema de muestra relevante.

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