Anticuerpo policlonal Anti-SARS-CoV-2 3CLpro para WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la 3CLpro del SARS-CoV-2

• La glicoproteína de la espiga (S) es una proteína de fusión viral de clase I que media la entrada del SARS-CoV-2 en las células huésped. Se sintetiza como un precursor y se escinde proteolíticamente en las subunidades S1 y S2.
• La subunidad S1 contiene el dominio de unión al receptor (RBD) que se une al receptor humano ACE2 (enzima convertidora de angiotensina 2) para facilitar la unión viral a las células huésped. Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Las vías de entrada alternativas utilizan neuropilina-1 (NRP1), NRP2, integrinas o ASGR1, lo que puede contribuir al tropismo tisular, particularmente en células epiteliales olfativas que expresan bajos niveles de ACE2. Referencias relacionadas: PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• La subunidad S2 media la fusión de membranas mediante un reordenamiento conformacional dependiente de bisagra, pasando del estado de horquilla pre-fusión al post-fusión, requiriendo el escisión en el sitio S2' por proteasas del huésped como TMPRSS2 o catepsina L. Referencias relacionadas: PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• El dominio del tallo de S contiene tres bisagras, proporcionando a la cabeza de unión al receptor una notable libertad de orientación, lo que puede facilitar la evasión inmune. Referencias relacionadas: PMID:32817270
• La localización subcelular incluye la membrana del virión, la membrana del compartimento intermedio retículo endoplásmico–Golgi (ERGIC) del huésped y la membrana celular del huésped, consistente con sus funciones en el ensamblaje, la salida y la entrada.
• La proteína está fuertemente glicosilada y contiene enlaces disulfuro conservados, regiones de hélice enrollada y dominios transmembrana; también exhibe propiedades superantigénicas y contribuye a la evasión inmune.
• Su peso molecular es de aproximadamente 141 kDa, y es un objetivo clave para anticuerpos neutralizantes, ensayos de diagnóstico y desarrollo de vacunas.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Dado que el inmunógeno es un fragmento recombinante de 3CLpro (aminoácidos 1-306), utilice controles positivos apropiados como lisados de células infectadas con SARS-CoV-2 o 3CLpro recombinante purificada para validar la especificidad.
• Para Western blot, considere optimizar las condiciones de bloqueo y dilución del anticuerpo; se espera una banda de aproximadamente 34 kDa (3CLpro de longitud completa), pero el proveedor reporta una banda de 141 kDa (probablemente correspondiente a la proteína Spike). Verifique la banda detectada con marcadores de peso molecular y antígenos de control apropiados.
• En experimentos de inmunofluorescencia/ICC, incluya pasos de permeabilización para la detección de proteasas intracelulares y contracoloración con marcadores de orgánulos para evaluar la localización subcelular.
• Para ELISA, la naturaleza policlonal permite su uso tanto como anticuerpo de captura como de detección en formatos sándwich. Combine con anticuerpos monoclonales contra epítopos distintos para mejorar la especificidad y la relación señal/ruido.
• Considere la posible reactividad cruzada con la 3CLpro de otros coronavirus; la alineación de secuencias y los ensayos de inhibición competitiva pueden ayudar a confirmar la especificidad.
• Valide siempre el anticuerpo en su sistema experimental específico, ya que el rendimiento puede variar según el tipo de muestra y los métodos de fijación.

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