Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-SARS-CoV-2 Spike S2 ECD para WB, DB, IF/ICC, IP y ELISA - P0DTC2

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Glucoproteína Spike (S)

• La glucoproteína spike (S) es una proteína de fusión viral de clase I que se escinde en subunidades S1 y S2. S1 contiene el dominio de unión al receptor, mientras que S2 ancla la proteína y ejecuta la fusión de membranas.
• S1 se une al receptor huésped ACE2 para iniciar la infección. Los receptores de entrada alternativos incluyen la neuropilina-1 (NRP1), la neuropilina-2 (NRP2), las integrinas y el receptor de asialoglicoproteína 1 (ASGR1), lo que puede contribuir al tropismo del SARS-CoV-2 en células con baja expresión de ACE2.
  Referencias relacionadas:
  PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086, PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• La escisión proteolítica de S2 en el sitio S2' por la TMPRSS2 del huésped (superficie celular) o la catepsina L (endosomal) desencadena cambios conformacionales irreversibles que conducen a la fusión de la envoltura viral con la membrana del huésped, liberando el genoma viral en el citoplasma.
  Referencias relacionadas:
  PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• La subunidad S2 contiene regiones de repetición de heptadas (HR1 y HR2) que se pliegan en un haz de seis hélices, acercando las membranas viral y celular para la fusión.
• A nivel subcelular, la proteína spike se localiza en la membrana del virión, en el compartmente intermedio entre el retículo endoplásmico y el aparato de Golgi del huésped (ERGIC) y en la membrana plasmática de la célula huésped.
• Spike está fuertemente N-glicosilada y palmitoilada, contiene enlaces disulfuro y funciona como un superantígeno; también suprime las respuestas inmunitarias innatas del huésped y contrarresta la tetherina.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca el dominio extracelular S2 (aa 686-1214), cubriendo elementos funcionales conservados que incluyen el péptido de fusión y las repeticiones de heptadas. Este diseño permite la detección de S2 incluso después de la liberación de S1.
• Para Western blot, la proteína spike de longitud completa migra a ~141 kDa en condiciones reductoras; se puede observar una banda de ~70-80 kDa para el S2 escindido. Valide sus condiciones de lisis y preparación de muestras.
• En inmunofluorescencia/ICC, incluya un paso de permeabilización para detectar la spike localizada en compartimentos intracelulares (ERGIC) además de la membrana plasmática.
• Para ELISA de captura, considere emparejar este anticuerpo policlonal con un anticuerpo monoclonal contra la subunidad S1 para medir específicamente la spike de longitud completa, o usarlo como reactivo de detección para cuantificar los niveles de S2.
• El Dot blot (DB) se puede utilizar para el cribado rápido de la expresión de antígeno en lisados celulares o proteínas recombinantes; optimice la concentración de antígeno y las condiciones del tampón.
• La inmunoprecipitación (IP) puede capturar complejos de spike; incluya controles negativos apropiados para evaluar la unión inespecífica.

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