Anticuerpo policlonal anti-Spike S2 del SARS-CoV-2 para WB, IP, ELISA - P0DTC2

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Glicoproteína de Espiga (Subunidad S2)

• La glicoproteína de espiga (S) es una proteína de fusión viral de clase I y el principal antígeno de superficie del SARS-CoV-2. Media la unión inicial a las células huésped mediante la unión del dominio de unión al receptor (RBD) en la subunidad S1 al receptor de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2). Referencias relacionadas: PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Tras la unión al receptor, la proteína S es escindida proteolíticamente en el sitio S2' por proteasas del huésped como la serina proteasa transmembrana 2 (TMPRSS2) o la catepsina L, desencadenando reordenamientos conformacionales en la subunidad S2 que impulsan la fusión de la envoltura viral con la membrana celular del huésped. Referencias relacionadas: PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• El virus también puede emplear receptores de entrada alternativos, incluyendo la neuropilina-1 (NRP1) y la neuropilina-2 (NRP2), que se expresan abundantemente en células epiteliales olfativas y podrían explicar los síntomas de anosmia; las integrinas; y el receptor de asialoglicoproteína 1 (ASGR1) de manera independiente a ACE2. Referencias relacionadas: PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Localización subcelular: La proteína S está presente en la membrana del virión y transita a través de la membrana del compartimento intermedio retículo endoplásmico–Golgi (ERGIC) del huésped; la fusión ocurre en la membrana celular del huésped o dentro de los endosomas.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen una extensa glicosilación N-ligada, puentes disulfuro, palmitoilación y escisión en las subunidades S1 y S2. Palabras clave de UniProt: proteína de la envoltura viral, transmembrana, glicoproteína, interacción huésped-virus, inmunoevasión viral, superantígeno e inhibición de la inmunidad innata del huésped.
• El dominio del tallo de la proteína S contiene tres bisagras flexibles que permiten una considerable libertad de orientación de la cabeza de unión al receptor, una característica crítica para la evasión inmune y el compromiso con el receptor. Referencias relacionadas: PMID:32817270

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético que abarca los aminoácidos 1174–1273 de la subunidad S2 (basado en la secuencia de referencia YP_009724390.1). Se espera que el anticuerpo reconozca tanto la proteína de espiga de longitud completa (~141 kDa) como el fragmento de escisión S2.
• Para Western blot, utilice condiciones de SDS-PAGE reductoras. Debe observarse una banda correspondiente a la espiga de longitud completa aproximadamente a 141 kDa; también pueden aparecer bandas de bajo peso molecular que representen productos de escisión de S2. En condiciones no reductoras, se pueden detectar oligómeros de orden superior (trímeros).
• Incluya controles positivos apropiados, como lisados de células infectadas con SARS-CoV-2 o proteína de espiga recombinante. Se recomienda un control de carga (por ejemplo, GAPDH, β-actina).
• Para inmunoprecipitación, considere usar perlas de proteína A/G previamente acopladas con el anticuerpo para minimizar la detección de bandas de cadena pesada.
• En ELISA, este anticuerpo policlonal puede servir como reactivo de captura o detección en ensayos tipo sándwich para la cuantificación de la proteína de espiga. Optimice las concentraciones de recubrimiento y los tampones de bloqueo para su formato de placa específico.

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