Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-SARS-CoV Spike RBD para WB y ELISA - P59594

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Glicoproteína Spike

• La glicoproteína Spike (S) del SARS-CoV, también conocida como E2 o proteína peplomérica, es una proteína de fusión viral de clase I que media la entrada del virus en las células huésped.
• Une el virión a la membrana de la célula huésped interactuando con los receptores huésped, principalmente la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2) y CLEC4M/DC-SIGNR, iniciando la infección.
• Tras la unión al receptor y la internalización del virus en los endosomas, la proteína S sufre cambios conformacionales. La escisión proteolítica por la catepsina L del huésped (CTSL) desenmascara el péptido de fusión, permitiendo la fusión de las membranas virales y endosómicas.
• La proteína S también funciona como una inmunoevasina viral al regular negativamente la tetherina del huésped (BST2) a través de la degradación lisosomal, contrarrestando la respuesta inmune innata del huésped.
• A nivel subcelular, la proteína Spike se localiza en la membrana del virión, la membrana de la célula huésped y la membrana del compartmente intermedio entre el retículo endoplasmático y el aparato de Golgi de la célula huésped.
• Las características estructurales clave incluyen un péptido señal, un ectodominio grande que contiene el dominio de unión al receptor (RBD), regiones de repetición de heptadas que forman una estructura de trímero de horquillas enrolladas en hélice (coiled-coil), un dominio transmembrana y una cola citoplasmática. Es glicosilada con enlaces N, contiene enlaces disulfuro y está palmitoilada.
• La glicoproteína Spike es esencial para la entrada del virus, la virulencia y la inmunoevasión, lo que la convierte en un objetivo principal para los reactivos de diagnóstico y el desarrollo de vacunas.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 350-450 dentro del RBD de la proteína Spike, por lo que este anticuerpo puede detectar la proteína Spike de longitud completa (~139 kDa) o la subunidad S1 escindida en WB en condiciones reductoras o no reductoras.
Para WB, considere el uso de SDS-PAGE con los controles apropiados, como la proteína Spike recombinante o lisados de células infectadas con SARS-CoV. Valide el anticuerpo en el sistema de muestra relevante para confirmar la especificidad. Para ELISA, se pueden diseñar ensayos de captura o detección utilizando RBD o proteína Spike recombinante. Los tampones de recubrimiento óptimos y las diluciones del anticuerpo deben determinarse experimentalmente. Debido a la especificidad por el RBD, este anticuerpo puede ser útil en ensayos de neutralización o competencia, pero dichas aplicaciones requieren una validación individual.

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