Anticuerpo policlonal de conejo anti-SIGLEC3/CD33 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P20138

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de SIGLEC3/CD33

• CD33 (Siglec-3, p67, gp67) es una proteína de membrana de tipo I de paso único y miembro de la familia de lectinas similares a inmunoglobulinas de unión al ácido siálico (Siglec), caracterizada por un dominio similar a Ig de tipo V en el extremo N-terminal y una cola citoplasmática que contiene dos motivos inhibidores basados en tirosina de los receptores inmunitarios (ITIM).
• Funciona como un receptor inhibidor; tras la unión de ligandos de ácido siálico o C1q, los ITIM son fosforilados por quinasas similares a Src, como LCK, lo que conduce al reclutamiento de las tirosina fosfatasas PTPN6/SHP-1 y PTPN11/SHP-2, que regulan negativamente la señalización inmunitaria (PubMed:10887109, 10556798, 10206955). Referencias relacionadas: PMID:10887109, PMID:10556798, PMID:10206955
• Se une preferentemente a ácidos siálicos unidos mediante enlaces alfa-2,3 y alfa-2,6, con mayor avidez por los glicanos unidos mediante enlaces alfa-2,6 (PubMed:7718872). Referencias relacionadas: PMID:7718872
• El efecto represor de CD33 sobre la activación de monocitos implica la señalización de la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) (PubMed:15597323). Referencias relacionadas: PMID:15597323
• A nivel subcelular, CD33 se localiza en la membrana plasmática y los peroxisomas.
• Se expresa específicamente en células del linaje monocítico/mieloide, incluidos monocitos, macrófagos y granulocitos; en el sistema nervioso central, se encuentra predominantemente en las células microgliales.
• Las palabras clave destacan sus funciones en la adhesión celular, la regulación inmunitaria y el corte y empalme alternativo, con modificaciones documentadas de glicoproteínas y fosfoproteínas.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 49-259 de CD33 humano (dominio extracelular), que incluye el dominio Ig de tipo V de unión al ácido siálico. Este diseño se dirige a la conformación nativa, por lo que resulta adecuado para detectar CD33 expresado en la superficie en aplicaciones similares a la citometría de flujo (IF/ICC) y en inmunohistoquímica (IHC-P).
• Para Western blot (WB), el peso esperado de la proteína es de aproximadamente 40 kDa, pero debido a la glicosilación, la banda observada puede aparecer con un peso molecular superior. Se recomienda utilizar un gel reductor y validar con controles positivos adecuados (por ejemplo, líneas celulares mieloides como HL-60 o THP-1).
• Al utilizar este anticuerpo policlonal en inmunoprecipitación o ELISA, debe tenerse en cuenta que su naturaleza policlonal puede aumentar la sensibilidad, pero también incrementar el fondo; se recomienda optimizar las condiciones de bloqueo y lavado.
• La reactividad cruzada con ratón y rata implica la conservación de los epítopos; sin embargo, debe comprobarse la alineación de secuencias para contextos experimentales específicos, y es esencial realizar la validación en la especie correspondiente.
• Para IHC-P, deben optimizarse los métodos de recuperación antigénica (por ejemplo, tampón de citrato, pH 6,0) y las condiciones de fijación tisular, ya que la accesibilidad de los epítopos puede variar.
• Este anticuerpo es adecuado como componente de captura o detección en un ELISA tipo sándwich si se combina con un anticuerpo compatible; los usuarios deben verificar su rendimiento en sus sistemas de tampones específicos.

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