Anticuerpo Policlonal Anti-Smad4 para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q13485

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de Smad4

• SMAD4 es el mediador común (co-SMAD) de la transducción de señales de la superfamilia TGF-β. Forma un complejo heterotrimérico con SMADs reguladas por receptores (p. ej., SMAD2/3) en el núcleo, lo cual es esencial para la regulación transcripcional mediada por TGF-β.
  Referencias relacionadas:
  PMID:25514493
• Actúa como coactivador transcripcional: SMAD4 facilita la unión al ADN del complejo SMAD2/SMAD4/FAST-1 y proporciona un dominio de activación para la transcripción impulsada por SMAD1 o SMAD2. También participa en el complejo del factor de transcripción AP-1 (SMAD3/SMAD4/JUN/FOS) para sinergizar las respuestas de TGF-β.
• Funciona como supresor tumoral; la pérdida o inactivación de SMAD4 es un evento frecuente en adenocarcinoma ductal pancreático, cáncer colorrectal y otras neoplasias, subrayando su papel en el control del crecimiento.
• En la fisiología muscular, SMAD4 actúa como un interruptor nodal: cuando es reclutado por miostatina (MSTN), promueve la atrofia a través de la señalización SMAD2/4; cuando se libera, cambia a la hipertrofia mediada por BMP vía SMAD1/5/8 (por similitud).
• SMAD4 regula positivamente la actividad quinasa de PDPK1 al promover su disociación de la proteína inhibidora 14-3-3 YWHAQ.
• Se localiza tanto en el citoplasma como en el núcleo; la translocación nuclear es inducida tras la estimulación con TGF-β o BMP, donde se acumula en complejos transcripcionalmente activos.
• Contiene el dominio MH1 N-terminal para la unión al ADN en SBEs (5’-GTCT/AGAC-3’) y el dominio MH2 C-terminal para la interacción con receptores, oligomerización y activación transcripcional. La proteína está sujeta a acetilación, fosforilación y ubiquitinación.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno corresponde al dominio MH2 C-terminal (aa 320–552), que está altamente conservado entre humano, ratón y rata, consistente con la reactividad cruzada reportada. Para nuevas especies, se recomienda alineamiento de secuencias.
• Para Western blotting (WB), se espera una banda de aproximadamente 60 kDa. Utilice controles de carga apropiados y valide en lisados tratados con TGF-β versus no tratados para confirmar la especificidad.
• Para inmunofluorescencia/inmunocitoquímica (IF/ICC) e inmunohistoquímica (IHC-P), puede observarse tinción nuclear o citoplasmática dependiendo del contexto de señalización. Incluya controles negativos apropiados (p. ej., líneas celulares knockout o péptido bloqueador) para verificar la especificidad de la señal.
• Para aplicaciones de ELISA, optimice el antígeno de recubrimiento y las condiciones de detección. El anticuerpo puede emparejarse con anticuerpos monoclonales contra diferentes epítopos para desarrollar sistemas ELISA sándwich para la cuantificación de SMAD4.
• Dada la naturaleza policlonal del anticuerpo, la consistencia entre lotes debe verificarse en ensayos cuantitativos críticos. Considere el uso de tecnología de anticuerpos recombinantes si la reproducibilidad es una preocupación principal.

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