Anti-STIM1 Rabbit PolymAb® para WB, IHC-P, IP, ELISA - Q13586

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de STIM1

• STIM1 actúa como un sensor de Ca²⁺ que regula dos canales principales de entrada de Ca²⁺ de rectificación interna en la membrana plasmática: los canales de Ca²⁺ activados por liberación (CRAC) y los canales de Ca²⁺ selectivos regulados por araquidonato (ARC), desempeñando un papel central en la homeostasis del calcio. Referencias relacionadas: PMID:15866891 PMID:16005298 PMID:16208375

• Tras el agotamiento de las reservas de Ca²⁺ del retículo endoplasmático (ER), STIM1 oligomeriza y se transloca desde la membrana del ER hasta las uniones entre el ER y la membrana plasmática, donde activa directamente las subunidades del canal CRAC ORAI1, ORAI2 y ORAI3 para generar una entrada de Ca²⁺ sostenida y oscilatoria. Referencias relacionadas: PMID:16537481 PMID:32415068

• STIM1 participa en la formación del esmalte, lo que destaca su función en los procesos de calcificación específicos de tejidos. Referencias relacionadas: PMID:24621671

• La proteína regula negativamente la respuesta de interferón de tipo I al retener el adaptador de señalización STING en el retículo endoplasmático, evitando así su activación y la señalización inmunitaria posterior. Referencias relacionadas: PMID:30643259

• STIM1 se expresa de forma ubicua en diversas células primarias humanas y líneas celulares tumorales, lo que subraya su función fundamental en la fisiología celular.

• A nivel subcelular, STIM1 se localiza en la membrana celular, la membrana del retículo endoplasmático, el citoplasma, el citoesqueleto y el retículo sarcoplásmico, lo que es coherente con su función de transporte dinámico.

• Las modificaciones postraduccionales incluyen la glicosilación N-ligada y la fosforilación, que pueden regular su estabilidad y actividad. La proteína contiene un péptido señal, una hélice transmembrana única y un dominio citoplasmático de bobina enrollada.

• El splicing alternativo genera múltiples isoformas, que pueden presentar una expresión específica de tejido o propiedades funcionales distintas.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 530–685, una región dentro del segmento citoplasmico C-terminal de STIM1. Este diseño puede favorecer la detección de la proteína de longitud completa y ciertas variantes de splicing, pero podría no detectar isoformas que carecen de esta región. Valide en su línea celular o tejido objetivo.

• Para la transferencia Western (Western blotting), se espera una banda predominante cercana a 77 kDa, aunque pueden aparecer bandas adicionales debido a la glicosilación o al splicing alternativo. Utilice controles de carga adecuados y confirme la especificidad con controles negativos (p. ej., silenciamiento por siRNA o knockout por CRISPR si están disponibles).

• En inmunohistoquímica (IHC-P), el método de recuperación de antígenos y la dilución del anticuerpo necesitan optimización, ya que la localización intracelular de STIM1 puede requerir permeabilización. Incluya controles de isotipo apropiados y valide la tinción con tejidos positivos y negativos conocidos.

• Para inmunoprecipitación (IP), preincube el anticuerpo con cuentas de proteína A/G para una captura eficiente y considere el entrecruzamiento (cross-linking) para evitar la interferencia de las cadenas pesadas/ligeras en el Western blot posterior. Confirme la coprecipitación de socios de interacción conocidos como ORAI1.

• Para ELISA, titre el anticuerpo frente al inmunógeno o al lisado celular para determinar las condiciones óptimas de recubrimiento y detección. Combínelo con un anticuerpo de detección emparejado o un secundario conjugado para configuraciones de ELISA sándwich.

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