Anticuerpo policlonal de conejo anti-TNF-α para WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P01375

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización del TNF-α

• El TNF-α es una citocina homotrimérica que existe tanto como un precursor transmembrana de tipo II de 26 kDa como una forma soluble de 17 kDa generada por escisión proteolítica. Su estructura incluye un dominio intracelular, una única hélice transmembrana y un dominio extracelular de unión al receptor en el extremo C.
• Codificado por el gen TNF (alias TNFA, TNFSF2) en el cromosoma 6 humano, el TNF-α es un miembro prototípico de la superfamilia del factor de necrosis tumoral, que comprende 19 ligandos que regulan diversos procesos biológicos.
• El TNF-α señala principalmente a través de dos receptores, TNFRSF1A/TNFR1 y TNFRSF1B/TNFBR. Es secretado principalmente por macrófagos activados y ejerce efectos pleiotrópicos, incluida la inducción de apoptosis en ciertas líneas celulares tumorales, fiebre (pirogenicidad) y caquexia.
• En la artritis reumatoide, el TNF-α deteriora la función de las células T reguladoras al aumentar la regulación de la proteína fosfatasa 1 (PP1), que desfosforila el residuo clave Ser-418 de FOXP3, causando discapacidad funcional de los Treg. Referencias relacionadas: PMID:23396208
• El TNF-α actúa como un mediador clave de la muerte celular en la acción anticancerígena de los neutrófilos estimulados por BCG combinados con un mimético de DIABLO/SMAC, demostrado en la línea celular de cáncer de vejiga RT4v6. Referencias relacionadas: PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• De forma sinérgica con IL-1B e IL-6, el TNF-α induce la producción de VEGF, promoviendo así la angiogénesis. Referencias relacionadas: PMID:12794819
• La localización subcelular es dinámica: la proteína de longitud completa reside en la membrana celular, mientras que el ectodominio escindido se secreta. El dominio intracelular (ICD) puede translocarse al núcleo y estimular la producción de IL-12 en células dendríticas.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen glicosilación, miristoilación, fosforilación y formación de enlaces disulfuro, todas críticas para el plegamiento, la actividad y la estabilidad adecuados.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a la región C-terminal (aa 134–233) del TNF-α humano, que se encuentra dentro de la porción madura y secretada. El anticuerpo policlonal resultante puede reconocer tanto las formas unidas a membrana como solubles de la citocina.
• Para el western blot, una banda a aproximadamente 26 kDa representa el precursor transmembrana de longitud completa, mientras que una banda a ~17 kDa indica la forma soluble liberada. Utilice lisados de macrófagos o monocitos estimulados con LPS como controles positivos.
• En inmunohistoquímica, las secciones incluidas en parafina pueden requerir la recuperación del antígeno mediada por calor. Considere probar tejidos conocidos por ser ricos en TNF-α, como ganglios linfáticos inflamados o sinovio reumatoide.
• Al aplicar inmunofluorescencia o ELISA, valide la especificidad del anticuerpo utilizando TNF-α recombinante o líneas celulares positivas/negativas relevantes que expresen el objetivo.

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