Anticuerpo policlonal de conejo anti-TOP2A (ADN topoisomerasa II alfa) para WB y ELISA - P11388

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de la ADN topoisomerasa II alfa

• La ADN topoisomerasa 2-alfa (TOP2A) es una enzima nuclear esencial para resolver problemas topológicos del ADN, como el superenrollamiento, la concatenación y la desconcatenación, procesos críticos durante la replicación del ADN, la transcripción y la segregación cromosómica. Referencias relacionadas: PMID:17567603, PMID:18790802, PMID:22013166
• TOP2A forma un homodímero y cataliza el paso dependiente de ATP de un segmento de ADN bicatenario a través de una rotura bicatenaria transitoria en otro segmento, alterando la topología del ADN mediante un mecanismo de escisión y religación.
• Pertenece a la familia de las ADN topoisomerasas de tipo II y está altamente conservada entre los eucariotas; comparte homología con TOP2B, la isoforma beta, pero presenta patrones de expresión y funciones diferenciados.
• Se localiza principalmente en el núcleo, incluidos el nucleoplasma y el nucléolo, y también se detecta en el citoplasma durante determinadas fases del ciclo celular.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen acetilación, fosforilación y ubiquitinación, que modulan la estabilidad de la proteína, la actividad enzimática y la unión a los cromosomas.
• Se expresa en diversos tejidos normales, como amígdalas, bazo, ganglios linfáticos, timo y testículos, y presenta una alta expresión en células proliferantes; su expresión está aumentada en muchos tipos de cáncer, incluidos los linfomas de alto grado y los tumores pulmonares de células escamosas. Referencias relacionadas: PMID:9155056
• Desempeña un posible papel en la regulación del ritmo circadiano al influir en la oscilación transcripcional de BMAL1.
• Se utiliza frecuentemente como marcador de proliferación y diana terapéutica en oncología; inhibidores como el etopósido se dirigen específicamente a TOP2A para inducir daños en el ADN de las células que se dividen rápidamente.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a un péptido cercano al extremo C-terminal de TOP2A humano; el anticuerpo puede reconocer tanto las isoformas de longitud completa como las truncadas, si están presentes.
• En Western blot, se espera una banda de aproximadamente 174 kDa en lisados de células o tejidos humanos; utilice un gel con un rango adecuado para proteínas de alto peso molecular y condiciones de transferencia apropiadas.
• Considere enriquecer las fracciones nucleares para mejorar la detección, ya que TOP2A es predominantemente nuclear.
• Para ELISA, el péptido sintético puede inmovilizarse como control positivo; el anticuerpo puede capturar TOP2A nativa en los pocillos de muestra recubiertos.
• Dado que se trata de un anticuerpo policlonal, se debe verificar la consistencia entre lotes para aplicaciones cuantitativas.
• Valide la especificidad del anticuerpo mediante silenciamiento con siRNA o comparándolo con líneas celulares negativas para TOP2A.

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