Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-TriMetil-Histona H3-K9 (Q16695/P68431) para Epigenética

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

• Función: La histona H3 es un componente central del nucleosoma, que envuelve y compacta el ADN en cromatina para regular la transcripción, la reparación del ADN, la replicación y la estabilidad cromosómica. Las modificaciones postraduccionales de las histonas, conocidas como el código de histonas, modulan la estructura de la cromatina y la expresión génica.
• Localización Subcelular: Se localiza predominantemente en el núcleo y se asocia con los cromosomas a lo largo del ciclo celular.
• Especificidad de Tejido: La variante de histona H3 H3.1t (Q16695) se expresa específicamente en células testiculares, mientras que la H3.1 canónica (P68431) se expresa ubicuamente en todos los tejidos.
• Modificaciones Postraduccionales: La histona H3 está sujeta a una amplia gama de modificaciones covalentes, siendo la lisina 9 un sitio clave de regulación. La lisina 9 puede sufrir citrulinación (conversión de arginina a citrulina) PMID:15345777 PMID:16567635 y dimetilarginina simétrica. Además, la trimetilación de la lisina 9 (H3K9me3) es una marca de cromatina represiva bien caracterizada. Este anticuerpo detecta específicamente la histona H3 trimetilada en la lisina 9. Referencias relacionadas: PMID:15345777, PMID:16567635

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del Inmunógeno: El anticuerpo se generó contra un péptido trimetilado sintético que abarca la lisina 9 de la histona H3 humana. Al utilizar este anticuerpo, considere validar su especificidad mediante pruebas contra péptidos H3 no modificados o péptidos que porten modificaciones alternativas (p. ej., monometil, dimetil, acetil) para confirmar la selectividad por el estado trimetilado.
• Western Blot (WB) y Dot Blot (DB): Para WB, utilice protocolos estándar de extracción de histonas (extracción ácida o alta sal) para enriquecer proteínas básicas. Asegure un bloqueo adecuado y la dilución del anticuerpo para minimizar la unión inespecífica. Para DB, verifique la reactividad cruzada contra otras modificaciones de histonas si es necesario.
• Inmunofluorescencia/Inmunocitoquímica (IF/ICC): Optimice las condiciones de permeabilización y fijación para preservar la morfología nuclear y la accesibilidad del antígeno. La tinción conjunta con DAPI puede ayudar a confirmar la localización nuclear.
• ELISA: Úselo para cribado de alto rendimiento; considere recubrir las placas con péptidos metilados sintéticos frente a no metilados para evaluar la especificidad.
• Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP, ChIP-seq) y CUT&Tag: Este anticuerpo es adecuado para el enriquecimiento basado en ChIP de cromatina marcada con H3K9me3. Se puede utilizar ChIP de entrecruzamiento (X-ChIP) o ChIP nativa (N-ChIP); valide con loci genómicos de control positivos y negativos (p. ej., heterocromatina frente a promotores activos). Para CUT&Tag, siga protocolos publicados para aplicaciones de baja entrada o de célula única. Valide el anticuerpo en su sistema de muestra relevante antes de experimentos a gran escala.

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