Anticuerpo policlonal de conejo Anti-Ube2N/Ubc13 para WB y ELISA - P61088

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de Ube2N/Ubc13

• Ube2N (también conocido como Ubc13, UbcH13) es una enzima conjugadora de ubiquitina E2 que forma un heterodímero con UBE2V1 o UBE2V2 para catalizar la síntesis de cadenas de poliubiquitina no canónicas unidas por Lys-63. Este tipo de poliubiquitinación no dirige las proteínas a la degradación por proteasoma, sino que cumple funciones regulatorias en la señalización, la reparación del ADN y el control del ciclo celular.
• La enzima desempeña un papel fundamental en la vía de tolerancia al daño del ADN sin errores, al mediar la poliubiquitinación de PCNA unida por Lys-63 junto con las ligasas E3 HLTF y SHPRH, lo cual es esencial para la reparación del ADN y la supervivencia celular después de estrés genotóxico.
• Ube2N participa en la señalización inmune innata: junto con RNF135 y UBE2V1, cataliza la poliubiquitinación de RIG-I unida por Lys-63 dependiente de ARN viral para activar la producción de interferón beta (PubMed:28469175). Además, el heterodímero UBE2V1-UBE2N promueve la actividad de restricción específica de la cápside por parte de TRIM5 al generar cadenas de poliubiquitina que activan el complejo de quinasa TAK1, lo que conduce a la expresión de genes inflamatorios mediados por NF-kB y MAPK (PubMed:31006531). Referencias relacionadas: PMID:28469175 PMID:31006531
• A nivel subcelular, Ube2N se localiza tanto en el núcleo como en el citoplasma, lo que coincide con sus diversas funciones en la reparación del ADN (nuclear) y las vías de señalización citoplasmáticas.
• La proteína sufre modificaciones postraduccionales que incluyen acetilación y formación de enlaces disulfuro, y funciona mediante la formación de enlaces isopéptidos durante la transferencia de ubiquitina. Pertenece a la familia de enzimas conjugadoras de ubiquitina E2 y se clasifica dentro de la vía de conjugación de Ubl.
• Ube2N participa en la activación transcripcional de genes diana y desempeña un papel en la progresión y diferenciación del ciclo celular. También interviene en la vía de señalización de IL-17A al mediar la poliubiquitinación de TRAF6 unida por Lys-63 junto con TRAF3IP2.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno utilizado para generar este anticuerpo policlonal de conejo incluye la secuencia completa de la proteína Ube2N humana (aa 1–152). Este diseño puede permitir el reconocimiento de múltiples epitopos, lo que potencialmente proporciona una detección robusta incluso si algunos epitopos están enmascarados o desnaturalizados. Sin embargo, se debe tener en cuenta la posible reactividad cruzada con otras enzimas E2 que compartan regiones conservadas; se recomienda la validación en el sistema de muestras correspondiente.
• El anticuerpo ha sido validado para Western blotting (WB) y ELISA por el proveedor. Para WB se espera una banda cerca de los 17 kDa. Es recomendable confirmar la especificidad usando lisados de control positivos y negativos, particularmente de células humanas, de ratón o de rata, dada la reactividad cruzada reportada.
• Dados los roles de Ube2N en diversas vías, los investigadores pueden explorar su expresión dinámica o modificación en condiciones de daño al ADN, estimulación inmune innata o parada del ciclo celular. Los niveles de detección endógena pueden variar; puede ser necesario optimizar la dilución del anticuerpo y los tiempos de exposición.
• Para aplicaciones de ELISA, el emparejamiento con un anticuerpo de captura o antígeno adecuado puede ayudar a establecer ensayos cuantitativos. Se recomienda evaluar la linealidad y sensibilidad usando proteína Ube2N recombinante como estándar.

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