Anticuerpo policlonal de conejo anti-ULK4 para WB, IF/ICC, ELISA - Q96C45

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de ULK4

• ULK4 es una pseudocinasa que pertenece a la familia de las cinasas tipo Unc-51, también conocida como FAM7C1 y REC01035, y se caracteriza por carecer de actividad cinasa catalítica, funcionando en su lugar como un adaptador molecular.
• En la vía de señalización hedgehog, ULK4 actúa en el cilio primario para mediar la asociación entre la cinasa STK36 y el factor de transcripción GLI2, promoviendo la fosforilación de GLI2 y su posterior liberación de la inhibición de SUFU, lo que permite la translocación nuclear de GLI2 y la activación de genes diana. Referencias relacionadas: PMID:38096226
• ULK4 se localiza en las proyecciones celulares, específicamente en el cilio, lo cual es consistente con su papel en la transducción de señales ciliares hedgehog.
• A nivel proteico, la expresión de ULK4 se detecta predominantemente en el cerebro, particularmente en neuronas posmitóticas, incluyendo neuronas GABAérgicas, y está ausente en los astrocitos.
• La proteína posee un dominio de unión a ATP y capacidad de unión a nucleótidos, aunque su clasificación como pseudocinasa implica una utilización de nucleótidos no canónica.
• Contiene múltiples regiones de repetición y está sujeta a fosforilación, como lo indica la identificación proteómica, lo que sugiere modificaciones postraduccionales reguladoras.
• La función adaptadora de ULK4 en la activación de GLI2 es fundamental para una señalización hedgehog adecuada, la cual regula el desarrollo embrionario, el mantenimiento de células madre y la regeneración tisular.

Guía experimental y consejos técnicos

• Para Western blotting, dado el alto peso molecular de ULK4 (aproximadamente 142 kDa), considere usar un gel de poliacrilamida de bajo porcentaje (por ejemplo, 6-8%) con tiempos de transferencia extendidos para asegurar una transferencia proteica eficiente.
• En inmunofluorescencia o inmunocitoquímica, debido a que ULK4 se localiza en los cilios, optimice las condiciones de fijación y permeabilización para preservar las estructuras ciliares, y confirme la colocalización con marcadores ciliares como la tubulina acetilada o Arl13b.
• Valide la especificidad del anticuerpo en su sistema de muestra incluyendo líneas celulares o tejidos que expresen ULK4 conocido (por ejemplo, cultivos neuronales o secciones cerebrales) y realizando controles de knockdown/knockout cuando sea factible.
• Como anticuerpo policlonal, la consistencia entre lotes puede variar; recomendamos titular cada lote nuevo e incluir controles positivos y negativos adecuados en cada experimento.
• Para aplicaciones de ELISA, asegúrese de utilizar el inmunógeno recombinante o la proteína ULK4 de longitud completa para el recubrimiento, a fin de confirmar la reactividad y determinar las diluciones de trabajo óptimas.

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