Anticuerpo policlonal de conejo Anti-VPS4A para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9UN37

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de VPS4A

• La proteína 4A asociada a la clasificación vacuolar de proteínas (VPS4A) es una ATPasa AAA que utiliza la hidrólisis de ATP para desensamblar los complejos ESCRT-III, esencial para los eventos de fisión de membrana en la vía endosomal.
• Es necesaria para la formación de cuerpos multivesiculares (MVB) y la clasificación de vesículas intraluminales (ILV); VPS4A redistribuye los componentes de ESCRT-III al citoplasma para su reutilización, regulando el tamaño de los endosomas, la organización del cilio primario y el sellado de la envoltura nuclear durante la anafase (PubMed:33186545). Referencias relacionadas: PMID:33186545
• Desempeña un papel central en la etapa de abscisión de la citocinesis; se mantiene en el cuerpo medio por ZFYVE19/ANCHR y CHMP4C hasta la finalización del punto de control, y la liberación de VPS4A desencadena luego la fisión de la membrana (PubMed:24814515). Referencias relacionadas: PMID:24814515
• Media la liberación exosomal de SDCBP, CD63 y sindecán, vinculando la maquinaria ESCRT a la biogénesis de exosomas (PubMed:22660413). Referencias relacionadas: PMID:22660413
• Es fundamental para la citocinesis normal de eritroblastos y la eritropoyesis; las mutaciones se asocian a la anemia diseritropoyética congénita (PubMed:33186543). Referencias relacionadas: PMID:33186543
• En conjunto con la maquinaria ESCRT, VPS4A participa en eventos de fisión de membrana topológicamente similares que son aprovechados por virus envueltos (por ejemplo, el VIH-1) para su gemación.
• Subcelularmente, se localiza en las membranas de endosomas tardíos, el cuerpo medio, el citoplasma y el huso mitótico.
• Se expresa de forma ubicua, y está asociado a variantes patológicas como cataratas, anemia hemolítica hereditaria y discapacidad intelectual (según se indica en las palabras clave de UniProt).

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los residuos 1-120 de VPS4A humana, una región N-terminal; esto puede facilitar la reactividad cruzada con los ortólogos de ratón y rata.
• Como anticuerpo policlonal, generalmente ofrece una detección robusta en aplicaciones desnaturalizantes (WB) y nativas (IHC-P, IF/ICC); sin embargo, las diluciones de trabajo óptimas deben determinarse empíricamente para cada ensayo.
• Para Western blot, se observa una banda esperada de aproximadamente 49 kDa; utilice lisados de células completas o tejidos que expresen VPS4A.
• Para IHC-P e IF/ICC, valide la especificidad con controles positivos y negativos apropiados, y optimice las condiciones de recuperación de antígeno o permeabilización.
• En ELISA, considere emparejar este anticuerpo con otros anticuerpos contra VPS4A para construir un ensayo sándwich después de la validación.
• Dado que VPS4A se localiza en el cuerpo medio durante la citocinesis, la sincronización de células en la mitosis tardía o el enriquecimiento de estructuras del cuerpo medio puede mejorar la detección para IF/ICC.
• Debido a que VPS4A se expresa de forma ubicua, verifique la eficiencia de silenciamiento o eliminación en experimentos de ARNi/CRISPR para confirmar la especificidad.

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