Anticuerpo Policlonal de Conejo Anti-WIPI1 para WB, ELISA - Q5MNZ9

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de WIPI1

• Identidad y familia de la proteína: WIPI1 (proteína 1 de interacción con fosfoinosítidos de dominio de repetición WD), también conocida como homólogo de la proteína Atg18 o WIPI de 49 kDa, pertenece a la familia WIPI de proteínas de repetición WD40 que interactúan con fosfoinosítidos. Estas repeticiones son esenciales para su unión a lípidos y funciones autofágicas.
• Función central de autofagia: WIPI1 es un componente clave de la maquinaria de autofagia, responsable de la formación de autofagosomas que transportan carga citoplasmática a los lisosomas para su degradación. Se une al fosfatidilinositol 3-fosfato (PtdIns3P) y es reclutado al retículo endoplasmático para nuclear el ensamblaje del forófago (PubMed:15602573, PubMed:20114074, PubMed:20484055). Referencias relacionadas:
  • PMID:15602573
  • PMID:20114074
  • PMID:20484055
• Posicionamiento en la vía: Actuando río abajo de ULK1 y PI3-quinasas, WIPI1 detecta el PtdIns3P generado en las membranas del RE. Luego ayuda a WIPI2 a reclutar el complejo ATG12-ATG5-ATG16L1, que impulsa directamente la elongación de la membrana autofagosómica naciente. Esta función es crítica tanto para la autofagia inducida por inanición y calcio como para la mitofagia (PubMed:28561066). Referencias relacionadas:
  • PMID:28561066
• Transferencia de lípidos y formación de complejos: Junto con WDR45/WIPI4, WIPI1 mejora la asociación de las proteínas ATG2 (ATG2A o ATG2B) con membranas ricas en PI3P, promoviendo así la transferencia de lípidos para la expansión del autofagosoma (PubMed:31271352). Referencias relacionadas:
  • PMID:31271352
• Xenofagia y defensa antimicrobiana: WIPI1 participa en la autofagia selectiva de patógenos, como Staphylococcus aureus, engullendo bacterias en vesículas tipo autofagosoma positivas para WIPI1 destinadas a la destrucción lisosomal (PubMed:22829830). Referencias relacionadas:
  • PMID:22829830
• Roles no autofágicos: Más allá de la autofagia canónica, WIPI1 regula la maduración de los melanosomas y la transcripción de enzimas melanogénicas, un proceso independiente de las vías inducidas por inanición (PubMed:21317285). También puede estar involucrado en el tráfico del receptor de manosa-6-fosfato (PubMed:15020712). Referencias relacionadas:
  • PMID:21317285
  • PMID:15020712
• Distribución tisular y localización subcelular: WIPI1 se expresa ubicuamente, con los niveles más altos en el músculo esquelético, corazón, testículo, páncreas y placenta, y está regulado al alza en muchas líneas celulares tumorales. Se localiza en la red trans-Golgi, endosomas, vesículas recubiertas de clatrina y estructuras preautofagosómicas, así como asociándose con el citoesqueleto.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del inmunógeno: El inmunógeno cubre los aminoácidos 187-446 del WIPI1 humano, una región que contiene múltiples repeticiones WD40. Esta porción central es conservada entre especies, lo que se alinea con la reactividad cruzada observada con ratón y rata.
• Transferencia Western (WB): Dada la alta expresión de WIPI1 en músculo, corazón y testículo, los lisados tisulares de estas fuentes son probablemente controles positivos adecuados. El peso molecular predicho es de ~49 kDa, pero pueden aparecer bandas adicionales debido al splicing alternativo o modificaciones postraduccionales. Se recomienda incluir un paso de bloqueo y validar la especificidad utilizando controles de siRNA o knockout.
• Aplicación ELISA: Este anticuerpo se puede utilizar en formatos de ELISA indirecto. Para el desarrollo de ELISA sándwich, considere emparejarlo con un anticuerpo monoclonal de captura específico para un epítopo no superpuesto. Valide con proteína WIPI1 recombinante (como el inmunógeno) o lisados celulares de células con alta expresión.
• Reactividad cruzada y consistencia entre especies: La reactividad cruzada reportada con humano, ratón y rata implica que el/los epítopo(s) reconocido(s) son conservados. No obstante, se recomiendan transferencias Western piloto con lisados de las tres especies para confirmar la reactividad y los patrones de banda.

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