Anticuerpo monoclonal APC anti-TLR3 humano para citometría de flujo - O15455

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de TLR3

• El receptor tipo Toll 3 (TLR3), también conocido como CD283, IIAE2 e IMD83, es una proteína de membrana de tipo I de un solo paso que pertenece a la familia de receptores tipo Toll, caracterizada por repeticiones ricas en leucina (LRR) en el dominio extracelular y un dominio del receptor Toll/interleucina-1 (TIR) en la cola citoplasmática.
• TLR3 es un componente clave tanto de la inmunidad innata como de la adaptativa, y funciona como un receptor de reconocimiento de patrones que detecta ARN de doble cadena (dsRNA), una característica molecular de la infección viral, desencadenando así respuestas inmunitarias antivirales.
• Tras la unión del dsRNA en los endosomas, TLR3 transmite señales exclusivamente a través de la proteína adaptadora TRIF (TICAM1), que activa los factores de transcripción NF-kappa-B e IRF3, lo que conduce a la producción de interferones de tipo I y citocinas proinflamatorias.
• A nivel subcelular, TLR3 se localiza principalmente en la membrana del retículo endoplásmico, la membrana de los endosomas y los endosomas tempranos, lo que le permite detectar el dsRNA viral liberado durante la acidificación endosomal.
• TLR3 se expresa en gran medida en la placenta y el páncreas, y se encuentra prominentemente en células dendríticas inmaduras CD11c+; cabe destacar que es el TLR con mayor expresión en el cerebro, particularmente en astrocitos, células gliales y neuronas.
• La proteína experimenta modificaciones postraduccionales, incluyendo glucosilación, fosforilación y conjugación con ubiquitina, que regulan su transporte y actividad de señalización.
• El corte y empalme alternativo genera múltiples isoformas, y las mutaciones en el gen TLR3 están asociadas con inmunodeficiencia y susceptibilidad a la encefalitis por herpes simple.
• Con un peso molecular aproximado de 104 kDa, TLR3 contiene múltiples enlaces disulfuro que estabilizan su ectodominio LRR con forma de solenoide, esencial para el reconocimiento de ligandos.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a la región extracelular N-terminal (aminoácidos 24–339), que abarca varios módulos LRR; asegúrese de que el anticuerpo reconozca la conformación nativa si se utiliza para la tinción de la superficie celular o de los endosomas en condiciones no desnaturalizantes.
• Para la citometría de flujo intracelular (FC), se requiere permeabilización; pruebe protocolos de fijación y permeabilización (por ejemplo, con saponina o Triton X-100) para optimizar la exposición del epítopo y preservar al mismo tiempo la estabilidad del fluoróforo.
• La expresión de TLR3 es predominantemente intracelular en células en reposo; la estimulación con dsRNA o la infección viral pueden aumentar la expresión y redistribuir el receptor, por lo que deben considerarse controles positivos adecuados, como células PBMC o células dendríticas tratadas con poly(I:C).
• No se ha informado de reactividad cruzada con otras especies; valide la detección en la matriz de muestra prevista, especialmente debido a la elevada expresión de TLR3 en los tejidos de la placenta y el cerebro.
• El conjugado APC proporciona una señal intensa para la citometría de flujo; utilice controles de compensación adecuados y evite la exposición prolongada a la luz para prevenir el fotoblanqueo.

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