Anticuerpo monoclonal de conejo anti-TNF-α de ratón conjugado con APC para FC (intracelular) - P06804

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización del TNF-α

• El factor de necrosis tumoral (TNF-α) es una citocina proinflamatoria secretada principalmente por macrófagos activados, perteneciente a la superfamilia de ligandos del factor de necrosis tumoral (TNFSF2). También se conoce como caquectina y está codificado por el gen Tnf (nombres alternativos: Tnfa, Tnfsf2).
• El TNF-α ejerce sus efectos biológicos mediante la unión a dos receptores distintos, TNFR1 (TNFRSF1A) y TNFR2 (TNFRSF1B), mediando una amplia variedad de respuestas celulares, entre ellas la apoptosis, la supervivencia celular y la inflamación.
• Esta citocina es un mediador clave de la respuesta de fase aguda y puede actuar como pirógeno endógeno, induciendo fiebre directamente o mediante la estimulación de la secreción de interleucina-1, y está implicada en el desarrollo de caquexia en estados de enfermedad crónica.
• En el tejido adiposo, el TNF-α induce resistencia a la insulina al inhibir la fosforilación de tirosina de IRS1 inducida por la insulina y la captación de glucosa, y promueve la degradación de la proteína GKAP42, contribuyendo a la patogénesis de la diabetes tipo 2. Referencias relacionadas: PMID:25586176
• El TNF-α desempeña un papel importante en el metabolismo óseo al promover la osteoclastogénesis y, por tanto, mediar la resorción ósea, vinculando la inflamación con la pérdida ósea en enfermedades como la artritis reumatoide. Referencias relacionadas: PMID:32741026
• El dominio intracelular (ICD) del TNF-α, generado mediante escisión proteolítica, puede actuar como molécula señalizadora para inducir la producción de IL-12 en células dendríticas, lo que pone de manifiesto una función independiente del receptor.
• A nivel subcelular, el TNF-α se sintetiza como una proteína transmembrana de tipo II (26 kDa) en la membrana celular y es escindido por la enzima convertidora del TNF-α (TACE) para liberar la citocina soluble de 17 kDa. La proteína experimenta varias modificaciones postraduccionales, entre ellas glucosilación, fosforilación, miristoilación y formación de enlaces disulfuro.
• Además de sus funciones citotóxicas e inflamatorias, el TNF-α también estimula la angiogénesis de forma sinérgica con IL-1β e IL-6 y, en determinadas condiciones, puede promover la proliferación y diferenciación celular, lo que refleja su naturaleza pleiotrópica.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno corresponde a los aminoácidos 80-235 del TNF-α de ratón (NP_038721.1), cubriendo la región madura soluble del TNF-α. Este diseño se dirige al dominio extracelular y potencialmente reconoce tanto las formas unidas a la membrana como las formas solubles.
• Para la citometría de flujo intracelular, los protocolos de fijación y permeabilización son críticos. Considere utilizar un protocolo estándar de tinción intracelular con un kit de fijación/permeabilización adecuado para citocinas.
• Dado que el TNF-α es una proteína secretada, las células en reposo pueden presentar niveles intracelulares bajos. Para una detección robusta, estimule las células (por ejemplo, con PMA/ionomicina o LPS) en presencia de un inhibidor del transporte de proteínas (por ejemplo, brefeldina A o monensina) para acumular el TNF-α en el aparato de Golgi.
• Se recomienda titular el anticuerpo para determinar la concentración óptima para su sistema experimental específico, comenzando con un intervalo de 0,5-5 µg por millón de células.
• Realice los controles adecuados, incluidas células no estimuladas y anticuerpos de control de isotipo, para diferenciar la tinción específica del fondo.
• El anticuerpo está conjugado con APC, un fluoróforo brillante adecuado para paneles de citometría de flujo multicolor. Asegúrese de realizar una compensación adecuada cuando se utilice con otros fluoróforos.

CamelBio: su puente integral de abastecimiento

CamelBio actúa como socio integral de abastecimiento de materias primas para diagnóstico in vitro (IVD), apoyando a fabricantes de productos de diagnóstico, laboratorios e institutos de investigación desde el concepto hasta la aplicación clínica. Este anticuerpo anti-TNF-α de ratón conjugado con APC es ideal para desarrollar ensayos sensibles basados en citometría de flujo y plataformas de inmunoensayo, y CamelBio puede ayudar con la adquisición a granel, las conjugaciones personalizadas y el abastecimiento de reactivos complementarios. Con un acceso fiable a pares de anticuerpos validados, anticuerpos monoclonales/policlonales optimizados y reactivos auxiliares, CamelBio simplifica su cadena de suministro para la investigación en inflamación e inmunología.