Anticuerpo Monoclonal APC/Cyanine7 Anti-HLA-DRA para Citometría de Flujo - P01903

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de HLA-DRA

• El gen HLA-DRA codifica la cadena alfa de la molécula MHC clase II HLA-DR, que se empareja con la cadena beta (HLA-DRB) para formar heterodímeros funcionales en células presentadoras de antígeno. Este complejo presenta péptidos antigénicos a células T CD4+, orquestando funciones efectoras de linfocitos T colaboradores, respuestas de anticuerpos y activación de macrófagos (PubMed:15265931, PubMed:15322540, PubMed:17334368). Referencias relacionadas: PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Normalmente presenta péptidos extracelulares de 10–30 aminoácidos derivados de antígenos internalizados y procesados en los lisosomas, siendo un residuo ancla hidrofóbico en la posición 1 crítico para la unión (PubMed:8145819). Referencias relacionadas: PMID:8145819
• En el microambiente tumoral, HLA-DR presenta péptidos de células tumorales apoptóticas o proteínas tumorales secretadas captadas por CPA, influyendo en la inmunidad antitumoral (PubMed:31495665). Referencias relacionadas: PMID:31495665
• Además, HLA-DR presenta péptidos de proteínas intracelulares vía macroautofagia, un proceso esencial para la selección tímica de células T y el mantenimiento de la tolerancia inmunológica central (PubMed:17182262, PubMed:23783831). Referencias relacionadas: PMID:17182262 PMID:23783831
• La localización subcelular abarca la membrana celular, las membranas endosomales/lisosomales y los autolisosomas, reflejando su papel dinámico en el procesamiento y presentación de antígenos.
• Se expresa en células presentadoras de antígeno profesionales (macrófagos, células dendríticas, células B) y células epiteliales tímicas (a nivel de proteína) (PubMed:15322540, PubMed:23783831, PubMed:31495665). Referencias relacionadas: PMID:15322540 PMID:23783831 PMID:31495665
• La proteína presenta una secuencia señal N-terminal, una hélice transmembrana única y dos enlaces disulfuro en el dominio extracelular; sufre glicosilación ligada a N y puede ser ubiquitinada.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Este anticuerpo monoclonal conjugado con APC/Cyanine7 se generó contra HLA-DR humana recombinante; es probable que reconozca un epítopo conformacional. Para citometría de flujo, utilice protocolos estándar de tinción de superficie en células vivas, manteniendo anticuerpos y células fríos para prevenir la internalización del antígeno.
• Dada la reactividad cruzada conservada con el mono cinomolgo, considere experimentos de titulación tanto para muestras humanas como de NHP para determinar la concentración de trabajo óptima.
• Para minimizar la unión inespecífica en muestras ricas en células mieloides, incluya un paso de bloqueo del receptor Fc (por ejemplo, TruStain FcX humano o similar) y controles isotipo apropiados.
• La banda de 29 kDa (cadena HLA-DRA) a menudo se detecta como parte del heterodímero α/β de MHCII en la superficie celular; en condiciones reductoras, la cadena alfa puede migrar a un peso molecular aparente ligeramente mayor debido a la glicosilación.
• Para tinción intracelular, se requiere fijación/permeabilización suave; valide el protocolo en su sistema de muestra, ya que el epítopo puede ser sensible a tratamientos agresivos.

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