Anticuerpo Monoclonal de Conejo Anti-Ratón CD45 APC/Cianina7 para Citometría de Flujo - P06800

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización del CD45

• La proteína tirosina-fosfatasa C de tipo receptor (CD45), codificada por el gen PTPRC, es una fosfatasa transmembrana esencial para la transducción de señales en células inmunes. El empalme alternativo genera múltiples isoformas (p. ej., CD45R, B220) con dominios extracelulares distintos.
• El CD45 es necesario para la activación de células T a través del receptor de antígeno, actuando como un regulador positivo al unirse a DPP4. Modula el umbral de la señalización del receptor de células T.
• La región intracelular contiene dos dominios de proteína tirosina fosfatasa (PTP); el primero posee actividad catalítica, mientras que el segundo influye en la especificidad del sustrato y la actividad.
• El CD45 desfosforila quinasas de la familia Src como LYN, FYN y LCK, regulando así sus actividades de quinasa y cascadas de señalización descendentes en linfocitos.
• La interacción con CLEC10A en células presentadoras de antígenos (p. ej., células dendríticas inmaduras) ajusta finamente la activación de células T, contribuyendo al mantenimiento de la autotolerancia.
• El CD45 se localiza en la membrana celular y se enriquece en balsas de membrana y la sinapsis inmunológica, posicionándolo para la integración de señales del receptor.
• Las modificaciones postraduccionales incluyen una glicosilación N y O extensa, lo que influye en la expresión de isoformas y las interacciones proteína-proteína.
• Conocido como antígeno común de leucocitos (L-CA) y Ly-5, el CD45 se expresa ampliamente en todas las células hematopoyéticas nucleadas, con patrones específicos de isoformas que distinguen subconjuntos de leucocitos.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca los aminoácidos 26–566 del CD45 de ratón, cubriendo una gran parte del dominio extracelular. Este diseño probablemente permite el reconocimiento de múltiples isoformas de CD45, pero los usuarios deben verificar la especificidad de la isoforma en su sistema.
• Para la citometría de flujo, titular el anticuerpo conjugado con APC/Cianina7 en leucocitos de ratón para determinar la concentración óptima de tinción, e incluir controles de isotipo apropiados y controles de fluorescencia menos uno (FMO).
• APC/Cianina7 emite en el canal rojo lejano (~780 nm), lo que permite una separación clara de fluoróforos comunes como FITC, PE y APC. Utilice una línea de láser compatible (p. ej., excitación de 633 nm) y juegos de filtros apropiados.
• Debido a la alta expresión de CD45 en leucocitos, evite la sobretinción que puede causar unión no específica; una dilución inicial típica de 0.25–1.0 µg por millón de células en citometría de flujo es un punto de referencia razonable.
• Para el diseño del panel, considere el CD45 como un marcador pan-leucocitario para seleccionar células inmunes vivas, y luego combinar con anticuerpos específicos de linaje (p. ej., CD3, CD19) para inmunofenotipificación.

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