Anticuerpo Monoclonal Biotina Anti-CD8a para Citometría de Flujo - P01732

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de CD8a (Glicoproteína de superficie de células T, cadena alfa CD8)

• CD8a es una glicoproteína integral de membrana que actúa como correceptor para moléculas del MHC clase I en células T, permitiendo el reconocimiento de antígenos peptídicos derivados de proteínas citosólicas.
• Interactúa simultáneamente con el receptor de células T (TCR) y el MHC clase I en células presentadoras de antígeno, reclutando la quinasa Src LCK para iniciar cascadas de señalización que conducen a la activación de células T, producción de linfocinas y citotoxicidad.
• CD8a forma heterodímeros con CD8B en células T derivadas del timo u homodímeros (CD8a/CD8a) en un subconjunto de células asesinas naturales (NK), células T de memoria, linfocitos intraepiteliales, monocitos y células dendríticas.
• La proteína se localiza en la membrana celular, pero también existe una forma secretada, probablemente derivada de un empalme alternativo.
• Las modificaciones postraduccionales clave incluyen glicosilación, formación de enlaces disulfuro y palmitoilación, importantes para su estructura y asociación con la membrana.
• CD8a tiene un dominio tipo inmunoglobulina y es parte del sistema inmunitario adaptativo, con funciones en la selección tímica y la generación de células T CD8 de memoria.
• Las variantes de la enfermedad en CD8A se asocian con inmunodeficiencias, lo que destaca su papel crítico en la defensa inmunitaria.

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El anticuerpo se genera contra una proteína recombinante correspondiente al dominio extracelular (aa 22-182) del CD8A humano, que incluye la región crítica de unión al MHC clase I; considere confirmar la especificidad utilizando líneas celulares que expresen CD8a y líneas con knockout de CD8a en citometría de flujo.
• Para aplicaciones de citometría de flujo, las concentraciones óptimas de tinción deben titularse utilizando células primarias relevantes (por ejemplo, PBMCs humanas o linfocitos de mono cinomolgo) debido a la variabilidad en la densidad del antígeno; un sistema de detección con biotina-estreptavidina puede amplificar la sensibilidad.
• La reactividad cruzada con CD8a de mono cinomolgo permite estudios traslacionales, pero verifique el rendimiento en su sistema de ensayo específico, ya que la conservación del epítopo puede variar.
• Dado que CD8a se expresa en múltiples subconjuntos inmunitarios, las estrategias de selección (gating) deben incorporar marcadores adicionales (por ejemplo, CD3, CD4) para distinguir las células T citotóxicas de las células NK y las poblaciones de memoria.
• Para la tinción intracelular, la permeabilización puede afectar la accesibilidad del epítopo; considere probar protocolos de fijación/permeabilización con controles positivos y negativos.

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