CAST Rabbit pAb para WB, ELISA - P20810

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Calpastatina

• La calpastatina (CAST) es un inhibidor endógeno específico de la calpaína, una familia de proteasas cisteínicas dependientes de calcio (EC 3.4.22.-) implicadas en el remodelado del citoesqueleto, la transducción de señales y la apoptosis.
• Al unirse e inhibir firmemente la calpaína, la calpastatina regula la actividad de las proteasas en el tejido muscular, desempeñando un papel crítico en la ternurización de la carne post mortem y posiblemente en el control de la degradación de las proteínas musculares en las células vivas.
• El gen CAST sufre un empalme alternativo extenso, generando múltiples isoformas con distribuciones tisulares y capacidades inhibitorias distintas.
• La calpastatina contiene cuatro dominios inhibitorios repetitivos (dominios L), cada uno capaz de inhibir la calpaína de forma independiente, junto con un dominio L terminal N y una cola terminal C; esta arquitectura de repetición múltiple subyace a su potente inhibición cooperativa de proteasas.
• Las modificaciones post-traduccionales incluyen acetilación, fosforilación, ubiquitinación y formación de enlaces de isopéptidos, que pueden modular la estabilidad, la localización y la eficiencia inhibitoria de la proteína.
• Se detecta la expresión de calpastatina en una amplia gama de tejidos, con una presencia caracterizada en el esperma (como componente BS-17) y asociación con enfermedades como la queratodermia palmoplantar.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno es un péptido sintético que abarca los aminoácidos 510–610 de la CAST humana; la reactividad del anticuerpo puede verse influenciada por el uso de isoformas o modificaciones post-traduccionales en esta región.
• Para el Western blot, considere optimizar la concentración del anticuerpo primario (p. ej., 1:500–1:2000) y usar controles positivos apropiados como lisados de HeLa, HEK293 o músculo esquelético, donde la calpastatina se expresa endógenamente.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con ratón y rata; verifique los patrones de bandas en estas especies, ya que los pesos moleculares pueden diferir ligeramente debido a la variación de isoformas.
• Para ELISA, titule el anticuerpo contra el péptido inmunógeno o la proteína recombinante de longitud completa para establecer las concentraciones de trabajo; use pasos de bloqueo y lavado adecuados para reducir el ruido de fondo.
• Debido a que este es un anticuerpo policlonal, puede detectar múltiples isoformas de calpastatina; confirme la especificidad mediante experimentos de knockdown con siRNA o sobreexpresión en modelos celulares relevantes.

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