Anticuerpo policlonal de conejo contra PARP escindida (Asp214) - Q921K2

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: función y localización de la poli[ADP-ribosa] polimerasa

• Enzima clave de reparación del ADN: PARP1 media la poli-ADP-ribosilación (PARilación) de proteínas diana en respuesta al daño del ADN, reclutando la maquinaria de reparación a las roturas de cadena sencilla.
• Marcador de apoptosis: Durante la apoptosis, las caspasas-3 y -7 escinden PARP1 de longitud completa (113 kDa) en Asp214, generando un fragmento de 89 kDa que se une irreversiblemente a las roturas del ADN y bloquea la reparación, promoviendo la muerte celular programada.
• Apoptosis mediada por AIFM1: El fragmento escindido experimenta auto-PARilación y actúa como portador de poli-ADP-ribosa, desencadenando la translocación de AIFM1 desde las mitocondrias al núcleo para inducir una fragmentación extensa del ADN.
• Distribución subcelular: Se localiza principalmente en el núcleo (nucleoplasma y nucléolo) y se asocia con la cromatina; tras la escisión, el fragmento se transloca al citosol.
• Dominios funcionales: Contiene motivos de dedos de zinc para la unión al ADN, un dominio de automodificación y un dominio catalítico C-terminal que utiliza NAD+ como sustrato.
• Familia génica: Pertenece a la superfamilia de las PARP; Parp1 (Adprt1) es el miembro fundador. También se conoce como ADPRT, ARTD1 y PPOL.
• Modificaciones postraduccionales: La auto-poli-ADP-ribosilación extensa modula su propia actividad y sirve como andamiaje para otros factores de reparación. La escisión por caspasas es un acontecimiento regulador clave.
• Palabras clave: ADP-ribosilación, enzima alostérica, apoptosis, cromosoma, citoplasma, daño del ADN, reparación del ADN, unión al ADN, glicosiltransferasa, inmunidad, inmunidad innata, enlace isopeptídico, unión a metales, NAD, nucleotidiltransferasa, núcleo, identificación proteómica, repetición, transcripción, regulación de la transcripción, transferasa, zinc, dedo de zinc.

Orientación experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno abarca los residuos 201-300 de PARP1 de ratón, lo que incluye el sitio de escisión por las caspasas-3/7 en Asp214. Este diseño permite el reconocimiento específico de la forma escindida en experimentos de apoptosis.
• Para Western blot (WB), utilice lisados de células o tejidos de ratón tratados con inductores de apoptosis (por ejemplo, estaurosporina o etopósido) para mejorar la señal. La proteína de longitud completa migra a aproximadamente 113 kDa, mientras que el fragmento escindido aparece a aproximadamente 89 kDa.
• Para ELISA, considere utilizar el anticuerpo como reactivo de captura o detección en ensayos tipo sándwich; la combinación con un anticuerpo pan-PARP permite diferenciar la PARP escindida de la PARP total.
• Valide la especificidad del anticuerpo utilizando líneas celulares con knockout de PARP1 o controles con inhibidores de caspasas para confirmar que la banda detectada desaparece en condiciones no apoptóticas.
• Evite ciclos repetidos de congelación y descongelación para mantener la integridad del anticuerpo; el almacenamiento a corto plazo a 4 °C es aceptable, pero para el almacenamiento a largo plazo se recomienda conservarlo a -20 °C o menos.

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