Anticuerpo policlonal de conejo DiMetil-Histona H3-K27 (Q16695/P68431) para investigación epigenética y ChIP

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de la Histona H3

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad fundamental de la cromatina. Los nucleosomas envuelven y compactan el ADN, limitando su accesibilidad a la maquinaria celular y, por lo tanto, desempeñando un papel central en la regulación de la transcripción, la reparación del ADN, la replicación del ADN y la estabilidad cromosómica.

La histona H3 está sujeta a una gran variedad de modificaciones postraduccionales (PTM), que incluyen acetilación, metilación, fosforilación, citrulinación y muchas otras, denominadas colectivamente "código de histonas". Estas modificaciones regulan dinámicamente la estructura de la cromatina y la expresión génica. La cola N-terminal de la histona H3 es particularmente rica en residuos modificables, siendo la lisina 27 (K27) un sitio crítico para eventos de metilación. La di-metilación de H3K27 (H3K27me2) se asocia con la represión transcripcional y el mantenimiento de la heterocromatina.

El genoma humano codifica varias variantes de histona H3. Q16695 (H3-4, también conocida como H3.1t) es una histona específica de testículo expresada principalmente en células testiculares, mientras que P68431 (H3C1/H3C2/H3C3/H3C4/H3C6/H3C7/H3C8/H3C10/H3C11/H3C12) representa las variantes canónicas H3.1 dependientes de replicación expresadas en células somáticas. Ambas variantes están altamente conservadas y comparten secuencias N-terminales idénticas donde se localiza K27. Se localizan exclusivamente en el núcleo y los cromosomas, donde forman una parte integral de las fibras de cromatina.

Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Guía experimental y consejos técnicos

• Para Western blot (WB), se espera una banda única alrededor de 15 kDa correspondiente a la histona H3. Utilice controles positivos y negativos apropiados para confirmar la identidad de la banda y la especificidad de la di-metilación.
• Para ChIP y ChIP-seq, optimice las condiciones de entrecruzamiento (por ejemplo, formaldehído) y de fragmentación de la cromatina. Considere validar el enriquecimiento de loci diana conocidos de H3K27me2 utilizando qPCR o secuenciación paralela.
• El anticuerpo presenta reactividad cruzada con humano, ratón y rata, y se predice que tiene un amplio rango de reactividad. Sin embargo, es recomendable validar el rendimiento en la especie y tejido específicos de interés antes de experimentos a gran escala.
• Para ELISA y dot blot (DB), titule el anticuerpo e incluya pasos de bloqueo para minimizar la unión inespecífica; el péptido inmunógeno puede servir como control positivo.
• En inmunohistoquímica (IHC) e inmunofluorescencia (IF/ICC), tenga en cuenta que la histona H3 es nuclear; una contratinción (por ejemplo, DAPI) puede ayudar a visualizar la localización nuclear. Puede ser necesaria la recuperación antigénica.

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