Anticuerpo policlonal de conejo anti-DiMetil-Histona H3-K4 (Q16695/P68431) para WB, ChIP, ChIP-seq, IHC-P

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3.1t/Histona H3.1

La histona H3 es un componente central del nucleosoma, la unidad repetitiva fundamental de la cromatina. Junto con las histonas H2A, H2B y H4, forma un octámero alrededor del cual se enrollan 147 pares de bases de ADN, compactando el genoma y regulando la accesibilidad del ADN. Esta estructura es esencial para los procesos con plantilla de ADN, incluida la transcripción, replicación, reparación y estabilidad cromosómica.

La variante canónica de la histona H3.1 está codificada por múltiples genes (por ejemplo, HIST1H3A a HIST1H3J) y se deposita en el ADN recién replicado durante la fase S. Por el contrario, la isoforma H3.1t (gen H3-4 / HIST3H3) es una variante específica de testículo, expresada principalmente en células testiculares y potencialmente involucrada en el remodelado de la cromatina durante la espermatogénesis.

La histona H3 sufre extensas modificaciones postraduccionales (MPT) en su cola N-terminal flexible, formando un complejo "código de histonas" regulador. Las MPT conocidas incluyen metilación, acetilación, fosforilación, ADP-ribosilación, ubiquitinación y otras. La metilación de la lisina 4 (H3K4) es una marca clave: la dimetilación (H3K4me2) se asocia con elementos reguladores de genes activos y en espera, como promotores y potenciadores.

Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético correspondiente a la cola N-terminal (aminoácidos 1-100) de la histona H3 humana, una región que incluye el residuo K4 y está altamente conservada entre especies. El anticuerpo reconoce específicamente la forma dimetilada de K4.

La histona H3 se localiza en el núcleo y es un componente estructural de los cromosomas.

Referencias relacionadas: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• El inmunógeno abarca la cola N-terminal de la histona H3, lo que garantiza el reconocimiento de la región que contiene el residuo K4. Para la detección específica de metilación, valide con ensayos de bloqueo de péptidos apropiados o controles de histonas mutantes.
• Para transferencia Western (WB), se pueden usar extractos enriquecidos en histonas o lisados celulares totales. La banda esperada es de aproximadamente 15 kDa. Considere usar una membrana de transferencia de alta calidad y un bloqueo prolongado para minimizar el fondo.
• En inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y ChIP-seq, este anticuerpo puede ser adecuado para mapear la distribución de H3K4me2. Incluya loci de control positivo (por ejemplo, promotores activos) y loci de control negativo (por ejemplo, regiones intergénicas) para evaluar la especificidad. Al realizar ChIP-seq, la preparación de la biblioteca y la profundidad de secuenciación deben optimizarse según el diseño experimental específico.
• Para inmunohistoquímica (IHC-P) e inmunofluorescencia (IF/ICC), la recuperación de antígeno (por ejemplo, con tampón de citrato pH 6.0 mediado por calor) y la permeabilización pueden mejorar la detección. Pruebe diferentes métodos de fijación (por ejemplo, formalina frente a metanol), ya que pueden afectar la disponibilidad del epítopo.
• El anticuerpo muestra reactividad cruzada predicha con humano, ratón, rata y otras especies debido a la alta conservación de secuencia del extremo N-terminal de H3. Si usa una nueva especie, considere realizar una alineación de secuencias para confirmar la conservación del epítopo y realizar un experimento de control positivo.
• Los anticuerpos específicos de metilación pueden exhibir reactividad cruzada con otras marcas de metil-lisina. Para confirmar la especificidad, incluya experimentos de bloqueo competitivo con péptidos utilizando péptidos dimetil-K4 y otros péptidos modificados.
• Las diluciones óptimas deben determinarse empíricamente para cada ensayo.

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