Anticuerpo policlonal de conejo anti-DiMetil-Histona H3-K79 (Q16695/P68431) – Validado para WB, IHC-P, ChIP-seq

Especificaciones y Parámetros Principales del Producto

Antecedentes Biológicos: Función y Localización de la Histona H3

• La histona H3 es un componente central del nucleosoma, esencial para envolver y compactar el ADN en cromatina. Esta organización estructural regula la accesibilidad del ADN y juega un papel fundamental en la transcripción, reparación del ADN, replicación y estabilidad cromosómica. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

• La histona H3 existe en múltiples variantes. La histona H3.1 canónica (codificada por genes como H3C1–H3C12) se expresa de forma ubicua, mientras que la variante específica de testículo H3.1t (H3-4) se expresa principalmente en células testiculares. Ambas comparten una alta similitud de secuencia, incluyendo el residuo conservado K79. Referencias relacionadas: UniProt Q16695 (especificidad tisular), UniProt P68431

• Las modificaciones postraduccionales (MPT) en la histona H3, como metilación, acetilación, fosforilación y otras, constituyen el "código de histonas" que gobierna la dinámica de la cromatina. La lisina 79 (K79) es un sitio notable para la metilación (mono-, di- y trimetilación), y la dimetilación (H3K79me2) está implicada en la regulación transcripcional, reparación del ADN y silenciamiento telomérico. Referencias relacionadas: Para modificaciones relacionadas, ver PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:16457588

• Este anticuerpo se generó contra un péptido sintético que porta K79 dimetilada. Está diseñado para detectar específicamente el estado de dimetilación de la histona H3 en K79, con una reactividad amplia predicha en muchas especies debido a la conservación de la secuencia. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

• Localización subcelular: La histona H3 se localiza principalmente en el núcleo y en los cromosomas, donde forma parte del núcleo del nucleosoma. Referencias relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431

Guía Experimental y Consejos Técnicos

• Diseño del inmunógeno: El anticuerpo se generó utilizando un péptido sintético que contiene K79 dimetilada de la histona H3 humana (NP_003520.1). Para anticuerpos específicos de modificaciones similares, considere el uso de péptidos sintéticos con modificaciones definidas para garantizar una alta especificidad.
• Western blotting (WB): La histona H3 tiene un peso molecular predicho de ~15 kDa. Para obtener mejores resultados, utilice histonas extraídas con ácido o lisados celulares completos, y optimice el porcentaje de gel y las condiciones de transferencia para proteínas de bajo peso molecular. Valide en su sistema de muestra.
• Inmunohistoquímica (IHC-P) e Inmunofluorescencia (IF/ICC): Puede ser necesario recuperación de antígeno (por ejemplo, con buffer de citrato). Pruebe un rango de diluciones del anticuerpo; tenga en cuenta que la fijación del tejido y la inclusión pueden afectar la accesibilidad del epítopo.
• Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP/ChIP-seq): Este anticuerpo está listado para aplicaciones de ChIP y ChIP-seq. Asegure un entrecruzamiento adecuado (por ejemplo, con formaldehído) y fragmentación de la cromatina a ~200–500 pb. Incluya controles positivos y negativos apropiados para el estado de metilación.
• ELISA e IP: Son aplicables protocolos estándar. Para IP, el pre-limpieza y el uso de buffers de lisis apropiados (por ejemplo, RIPA para extracción de histonas) pueden mejorar la relación señal-ruido.
• Reactividad cruzada: El anticuerpo reconoce histona H3 humana, de ratón y de rata, con un amplio rango de especies adicionales predicho basándose en la homología de secuencia. Verifique siempre la reactividad cruzada en su especie objetivo.
• General: Como con cualquier anticuerpo policlonal, considere la variabilidad entre lotes y revalide al cambiar de lote. Almacene según lo recomendado (enviado en bolsa de hielo) y evite múltiples ciclos de congelación-descongelación.

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