DNMT1 pAb de conejo para WB, IF/ICC, IP, ELISA - P26358

Especificaciones y parámetros principales del producto

Antecedentes biológicos: Función y localización de DNMT1

• DNMT1 (ADN (citosina-5)-metiltransferasa 1) es la metiltransferasa de mantenimiento principal que copia los patrones de metilación del ADN en la hebra recién sintetizada durante la replicación del ADN, garantizando la herencia epigenética (PubMed:17200670, PubMed:21745816). Referencias relacionadas: PMID:17200670, PMID:21745816

• DNMT1 metila preferentemente dinucleótidos CpG hemimetilados y es esencial para la propagación fiel de los patrones de metilación durante la división celular (PubMed:21745816, PubMed:26070743). Referencias relacionadas: PMID:21745816, PMID:26070743

• Más allá del mantenimiento acoplado a la replicación, DNMT1 se asocia con la cromatina durante las fases G2 y M para mantener la metilación del ADN independientemente de la replicación (PubMed:21745816). Referencias relacionadas: PMID:21745816

• DNMT1 media la represión transcripcional directamente a través de la interacción con HDAC2 y coordina la metilación del ADN con las modificaciones de histonas (PubMed:10888872, PubMed:16357870). Referencias relacionadas: PMID:10888872, PMID:16357870

• En células de cáncer colorrectal, DNMT1 forma un complejo correpresor que media la hipermetilación del promotor inducida por KRAS oncogénico y el silenciamiento de genes supresores de tumor (PubMed:24623306). También mantiene un estado de represión transcripcional de genes en células madre embrionarias indiferenciadas (PubMed:24623306). Referencias relacionadas: PMID:24623306

• DNMT1 se expresa de forma ubicua, con niveles más altos en tejidos fetales, corazón, riñón, placenta y células mononucleares de sangre periférica, y niveles más bajos en bazo, pulmón, cerebro, intestino delgado, colon, hígado y músculo esquelético. La isoforma 2 es menos abundante que la isoforma 1.

• DNMT1 contiene un dominio dedo de zinc de tipo CXXC y sufre modificaciones postraduccionales reguladoras como acetilación, fosforilación y metilación.

• DNMT1 se localiza en el núcleo y se asocia con los cromosomas, lo que coincide con su función en la metilación de mantenimiento y la regulación transcripcional.

Guía experimental y consejos técnicos

• El inmunógeno cubre la región C-terminal (aa 760-1109) de la DNMT1 humana, que incluye el dominio catalítico de metiltransferasa; este diseño se dirige al sitio activo y puede mejorar la detección de la DNMT1 de longitud completa.
• Para western blotting, se espera una banda de aproximadamente 183 kDa; el uso de un gel de SDS-PAGE de bajo porcentaje (por ejemplo, 6–8%) y tiempos de transferencia prolongados pueden ayudar a resolver esta proteína de alto peso molecular.
• Los niveles de expresión de DNMT1 varían según el tipo de célula y tejido; valide el rendimiento del anticuerpo en su sistema de muestra específico usando controles positivos (por ejemplo, HeLa, HEK293) y negativos adecuados.
• Para inmunoprecipitación, optimice la concentración del anticuerpo y considere la reticulación a las perlas para reducir la interferencia de la cadena pesada de IgG alrededor de 50 kDa.
• En inmunofluorescencia/ICC, se requiere permeabilización nuclear (por ejemplo, con Triton X-100) y fijación adecuada para acceder al antígeno nuclear; la co-tinción con un marcador nuclear puede confirmar la localización.

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